摘要:
目的 探究微小型RNA-24(microRNA-24,miR-24)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)幼龄大鼠炎症反应的影响及作用机制.方法 将幼龄大鼠分为Control、ALI、ALI+miR-24 mimic mock及ALI+ miR-24 mimic组,利用脂多糖(LPS)建立幼龄大鼠ALI模型.miR-24 mimic mock及ALI+ miR-24 mimic分别处理模型大鼠后,计算大鼠肺组织干湿重比,qRT-PCR检测miR-24的mRNA表达,HE染色观察大鼠肺组织病理变化,Tunel检测肺组织细胞凋亡情况,Western blot检测肺组织中磷酸化核因子κB p65(nuclear factor κB p65,NF-κB p65)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(phosphorylation inhibitor of NF-κB,p-IκBα)及IκBα激酶(IκBα kinase,p-IKK)的表达.将大鼠肺泡巨噬细胞分为Control、LPS、LPS+ miR-24 mimic、LPS+ pcDNA-IL-1α(pc-IL-1α)及LPS+ miR-24 mimic+ pc-IL-1α组,利用LPS刺激细胞.miR-24 mimic及pc-IL-1α分别或同时转染细胞后,qRT-PCR检测miR-24的mRNA水平,生物信息预测miR-24与IL-1α的靶向关系,并利用荧光素酶报告试验检测.ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1α和IL-1β在各组幼龄大鼠血清中及各组大鼠肺泡巨噬细胞培养上清中的浓度.结果 miR-24在ALI幼龄大鼠肺组织的mRNA水平降低,miR-24 mimic可上调miR-24 mRNA表达.与Control组比较,ALI组幼龄大鼠肺泡内充满炎性细胞,肺干湿重比值增大,肺组织凋亡细胞百分比升高.与ALI组比较,ALI+miR-24 mimic mock组无统计学差异,ALI+ miR-24 mimic组肺泡内炎性细胞明显减少,肺干湿重比值减小,凋亡细胞百分比降低.miR-24 mimic可降低ALI幼龄大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1α和IL-1β的浓度,减少肺组织中p-IKK、p-IκBα及NF-κB p65的表达.miR-24在经LPS处理大鼠肺泡巨噬细胞中的mRNA水平降低.miR-24mimic减弱野生型IL 1α质粒(IL 1α wt)的荧光素酶活性,并可降低经LPS处理大鼠肺泡巨噬细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1α和IL-1β的浓度,而pc-IL-1α可提高这些炎症因子,并减弱miR-24 mimic对炎症反应的抑制作用.结论 miR-24 mimic可通过靶向IL-1α及抑制NF-κB激活,减轻ALI幼龄大鼠肺组织的炎症反应.