GAPDH

摘要： 为寻找山西耐旱的玉米品种,本试验选择目前主要的8个玉米栽培品种,通过人工控制水量模拟干旱胁迫,分析8个品种过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的变化。研究结果表明,与对照组相比,干旱胁迫诱导大丰14、大丰26、大丰30幼苗中CAT、APX和GAPDH活性增加;金科玉3308和DF2010的APX活性下降;大丰133和金科玉3308的GAPDH活性下降。由此可知,大丰14、大丰26、大丰30玉米幼苗对干旱胁迫表现出一定的抗性,这对玉米的抗旱筛选具有指导性意义。

摘要： 为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法,本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白,Western blot结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被,建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法;随后优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时筛选其他反应条件。结果显示,间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,GAPDH重组抗原与华枝睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的96份羊血清进行检测,阳性率为16.67%(16/96)。结果表明本试验建立的方法具有良好的敏感性和特异性,能够为早期诊断羊肝片吸虫病提供参考。

摘要： 目的 为获得能有效下调蛋白质巯基亚硝基化修饰的功能蛋白,从大鼠皮层组织中抽提总RNA,经逆转录PCR法获得GSNOR的cDNA片段,并重组到过表达载体pShuttle-IRES-GFP中.方法 利用电转染法将GSNOR过表达载体导入SH-SY5Y细胞,通过逆转录PCR及western法,验证重组载体在神经细胞系中的mRNA转录及蛋白表达效率.利用外源性一氧化氮供体GSNO处理SH-SY5Y细胞,建立硝化应激模型,通过生物素转化法检测该条件下胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平及GSNOR的去亚硝基化修饰能力.结果 成功克隆大鼠源GSNOR的cDNA,其过表达载体在神经细胞系中转录效率及蛋白表达水平均显著升高.结论 生物素转化法检测结果显示,GSNOR能有效降低胞内蛋白质的整体亚硝基化修饰水平,对于Parkin、PDI、GAPDH等介导神经退行性病变关键蛋白靶点的去亚硝基化修饰作用也得到验证.

摘要： 利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,克隆了马氏珠母贝(Pinctada fucata)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde -3 -phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因的全长 cDNA 序列.GAPDH 基因 cDNA 全长为1174 bp(GenBank 登录号:KX129947.1),其开放阅读框长度为1014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质分子量为36.04 ku,理论等电点7.66,无信号肽.蛋白质亚细胞定位显示 GAPDH 蛋白分布在细胞质中的可能性最大(69.6%).该蛋白具有1个甘油醛-3-磷酸脱氢酶NAD结构域以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶C末端结构域.系统进化分析表明,GAPDH在亲缘关系上与同为软体动物门的厚壳玉黍螺最近,与其动物学分类地位一致.荧光定量PCR分析显示,经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理后的受精卵GAPDH基因表达水平显著上升(P<0.05).

摘要： 达氏鲟(Acipenser dabryanus)是我国一类保护动物,具有重要的生态保护和种质资源价值.qRT-PCR等分子生物学技术在达氏鲟的保护和种质资源开发过程发挥着重要作用.qRT-PCR技术中内参基因的选择关系到检测结果的准确性.为筛选达氏鲟合适的内参基因,本实验用同源克隆结合本地Blast法克隆得到达氏鲟3个潜在的内参基因:β肌动蛋白(β-actin) (GenBank No.MH790260)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) (GenBank No.MH790259)、和延伸因子1α(elongation factor 1α,EF1-α)(GenBank No.MH790258);采用软件Mega 5.05、DNAStar 7.1、CPHmodels 3.2 和ClustalW 2.1分析3个基因的生物信息;使用qRT-PCR分析3个基因在达氏鲟脑、肝脏、肾脏、胰脏、脾脏、食道、胃、幽门盲囊、十二指肠、瓣肠、直肠、肌肉、鳃和皮肤组织中的Cq值,并使用软件geNorm,NormFinder和BestKeeper分析3个基因在14个组织中的表达稳定性.结果表明,达氏鲟潜在qRT-PCR内参基因β-actin、GAPDH和EF1-α的全长CDS分别为1 125、999和1 383 bp,分别编码375、333和461个氨基酸.生物信息学分析显示,3个基因推导的氨基酸序列和蛋白三维结构与其他物种高度一致.设计的β-actin、GAPDH和EF1-α qRT-PCR引物的扩增效率分别为92.2％、93.0％和92.7％;扩增产物的解链温度(m)值分别为84、83.5和85°C.综合geNorm,NormFinder和BestKeeper对3个内参基因14个组织表达稳定性的评价结果表明,3种内参基因的稳定性分别为EF 1-α＞ β-actin＞ GAPDH,且EF1-α和β-actin可作为达氏鲟qRT-PCR研究的内参基因.本实验获得达氏鲟3个潜在的内参基因β-actin、GAPDH和EF1-α的全长CDS,并证实EF1-α和β-actin适用于达氏鲟qRT-PCR研究,这将为qRT-PCR技术在达氏鲟研究中的应用提供基础资料.

摘要： 为制备马腺疫链球菌(Streptococcus equi subspecies equi)GAPDH蛋白的多克隆抗体,研究其免疫保护作用.以S.equi分离株为研究对象,利用PCR技术扩增其GAPDH基因并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌.诱导表达重组蛋白,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting分析.以纯化后的GAPDH重组蛋白免疫小鼠,用酶联免疫吸附法、攻击保护试验检测其免疫效果.结果显示,成功构建了pET-28a-GAPDH原核表达载体,纯化获得30 kDa重组蛋白.该蛋白质能特异性识别该菌抗血清,诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,在初次免疫后第45天,抗体水平效价可达1:24300,攻击保护率可达87.5％.该GAPDH重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护效果.

摘要： 为了分析斑马鱼GAPDH基因不同区域原核表达构建的诱导效应差异，应用生物信息技术分析斑马鱼GAPDH分子结构，通过定向删除技术，构建表达部分斑马鱼GAPDH蛋白片段的质粒。通过IPTG诱导，SDS-PAG检测，分析GAPDH基冈不同区域构建的蛋白表达差异。结果：引物对zGCKF／ZGCXR构建的GAPDH重组表达质粒具有IPTG诱导表达效应，而引物对ZGNKF／ZGNXR构建的质粒则不具有IPTG诱导表达效应。因此，为了在原核表达真核蛋白时应考虑过表达的真核蛋白是否会影响宿主的代谢以及是否会导致宿主的抵抗，设计引物时应当选择合适的区域构建重组质粒才能获表达产物。

摘要： 为了分析斑马鱼GAPDH基因不同区域原核表达构建的诱导效应差异,应用生物信息技术分析斑马鱼GAPDH分子结构,通过定向删除技术,构建表达部分斑马鱼GAPDH蛋白片段的质粒.通过IPTG诱导,SDS-PAG检测,分析GAPDH基因不同区域构建的蛋白表达差异.结果:引物对ZGCKF/ZGCΧR构建的GAPDH重组表达质粒具有IPTG诱导表达效应,而引物对ZGNKF/ZGNΧR构建的质粒则不具有IPTG诱导表达效应.因此,为了在原核表达真核蛋白时应考虑过表达的真核蛋白是否会影响宿主的代谢以及是否会导致宿主的抵抗,设计引物时应当选择合适的区域构建重组质粒才能获表达产物.

摘要： [Objective] As one of the key enzymes of the glycolysis in E.tarda,GAPDH was previously identified to be a broad-spectrum antigen and could be used as the target of bacterial vaccine design in aquaculture.We explore the mechanism of secretion of GAPDH in E.tarda.[Methods] Secretion of GAPDH in E.tarda EIB202 and mutants of several secretory pathways were analyzed by Western blot and ELISA.The levels of GAPDH in the supernatants of mutant library were analyzed through high-throughput screening.Quantitative real-time PCR was used to compare the mRNA expressions of mutants obtained from screening.[Results] Secretion of GAPDH in E.tarda is associated with classical secretion systems.Through high-throughput screening,two mutants △esrA and △esrC were found to have higher levels of GAPDH in the supernatants.Lacking of these two genes lead to significant up-regulation of secretion of GAPDH.[Conclusion] EsrA and EsrC both played a negative regulation role in GAPDH secretion.%[目的]迟缓爱德华氏菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中关键酶之一,前期研究证实是一种广谱性抗原,可作为水产养殖细菌病免疫防治中疫苗的开发靶点.本文探究迟缓爱德华氏菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶的胞外分泌机制.[方法]通过Western blot和ELISA方法考察迟缓爱德华氏菌经典分泌系统缺失株GAPDH胞外分泌情况;使用ELISA方法对迟缓爱德华民菌突变体文库的GAPDH胞外分泌进行了大规模筛查,并结合qRT-PCR对筛查得到的插入失活株进行了表达分析.[结果]经典分泌系统与GAPDH的胞外分泌存在一定相关性.突变体文库的大规模筛查得到两株GAPDH分泌量明显增加的插入失活株AesrA和△esrC,这两个基因的失活会导致GAPDH的胞外分泌量显著上调.[结论]迟缓爱德华民菌GAPDH的胞外分泌受EsrA和EsrC负调控.

摘要： 本发明提供一种牙鲆海豚链球菌GAPDH串联多表位多肽及其应用，所提供的串联多表位多肽，是用多肽接头连接的四个抗原表位肽；其中四个抗原表位肽的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1‑4。所提供的串联多表位多肽，其一种具体的氨基酸序列为SEQ ID NO:8。本发明另一个方面还提供一种海豚链球菌GAPDH多表位疫苗，是将上述的串联多表位多肽作为抗原与疫苗佐剂制备的。本发明所制备的多表位疫苗能够为牙鲆抗S.iniae感染提供较强的免疫保护，且效果明显高于GAPDH重组蛋白亚单位疫苗以及S.iniae灭活疫苗。

摘要： 本发明公开了一种以Gapdh基因为参照的鳙性别鉴定分子标记开发方法，属于鱼类遗传学领域。本发明发现了只在雄鳙基因组序列中存在的特异性序列(SEQ ID NO.2)，基于该特异性序列设计引物可用于鉴定鳙性别。从鳙基因组中调取Gapdh基因作为参照设计引物，与鉴定鳙性别的引物进行双重PCR扩增，利用琼脂糖电泳可以快速、准确地鉴定鳙的遗传性别。本发明开发的分子标记特异性强可以准确鉴定鳙的性别。使用Gapdh基因作为内参基因通过双重PCR进行鉴定，避免了因DNA降解、加样失误或PCR扩增失败等原因造成的性别判断错误。本发明具有快速、简便、准确率高等优点，可大批量且准确地鉴定鳙的遗传性别。

摘要： 本发明提供剑麻ACT和GAPDH基因序列，可作为剑麻内参基因的应用，并同时提供剑麻ACT和GAPDH作为内参基因的特异性引物，建立基于SYBR Green荧光染料技术的qRT‑PCR方法，为后续利用实时荧光定量PCR对剑麻烟草疫霉侵染、低温胁迫、盐胁迫和伤处理等逆境条件下基因表达分析提供稳定可靠的内参基因和技术方法。

摘要： 本发明属于生物医学技术领域，提供了一种用于血清抗体检测的巴氏杆菌GAPDH分子抗原多肽，所述GAPDH分子抗原多肽包含巴氏杆菌GAPDH表位，其氨基酸序列为如下三段序列之一，PMG‑2A：HATTATQKTVDGPSAKDWRGGRGA；PMG‑2B：TQKTVDGPSAKDWRGGRGAAQNIIP；PMG‑2D：KDWRGGRGAAQNIIPSSTGA。上述巴氏杆菌的GAPDH分子抗原表位多肽与养殖场常见细菌高免血清均不发生反应，具有高度的特异性，可以用于建立评估巴氏杆菌GAPDH免疫后血清抗体水平的检测方法。

摘要： 本发明提供了GAPDH和HPRT1在qRT‑PCR检测进入高原前后血液基因表达的应用，涉及分子生物学技术领域。本发明提供了GAPDH基因和HPRT1基因作为人血液中内参基因的应用，首次对进入高原前和持续低氧环境暴露后血液中的内参基因表达稳定性进行检测，得到持续低氧暴露条件下稳定表达的组合内参基因GAPDH和HPRT1，并在实际工作得到运用。本发明GAPDH和HPRT1的组合内参基因在持续低氧刺激后仍可表达稳定，而且能够反应功能基因在不同时间低氧环境刺激下细胞基因表达的变化，可作为定量高原低氧暴露前后血液中目的基因检测的内参基因。

摘要： 用某些噻嗪样化合物和/或相关化合物抑制GAPDH的方法。

摘要： 本发明属于生物医学技术领域，提供了一种用于血清抗体检测的巴氏杆菌GAPDH分子抗原多肽，所述GAPDH分子抗原多肽包含巴氏杆菌GAPDH表位，其氨基酸序列为如下三段序列之一，PMG‑2A：HATTATQKTVDGPSAKDWRGGRGA；PMG‑2B：TQKTVDGPSAKDWRGGRGAAQNIIP；PMG‑2D：KDWRGGRGAAQNIIPSSTGA。上述巴氏杆菌的GAPDH分子抗原表位多肽与养殖场常见细菌高免血清均不发生反应，具有高度的特异性，可以用于建立评估巴氏杆菌GAPDH免疫后血清抗体水平的检测方法。

摘要： 本发明公开了一种以Gapdh基因为参照的鳙性别鉴定分子标记开发方法，属于鱼类遗传学领域。本发明发现了只在雄鳙基因组序列中存在的特异性序列(SEQ ID NO.2)，基于该特异性序列设计引物可用于鉴定鳙性别。从鳙基因组中调取Gapdh基因作为参照设计引物，与鉴定鳙性别的引物进行双重PCR扩增，利用琼脂糖电泳可以快速、准确地鉴定鳙的遗传性别。本发明开发的分子标记特异性强可以准确鉴定鳙的性别。使用Gapdh基因作为内参基因通过双重PCR进行鉴定，避免了因DNA降解、加样失误或PCR扩增失败等原因造成的性别判断错误。本发明具有快速、简便、准确率高等优点，可大批量且准确地鉴定鳙的遗传性别。

摘要： 本发明提供了GAPDH和HPRT1在qRT‑PCR检测进入高原前后血液基因表达的应用，涉及分子生物学技术领域。本发明提供了GAPDH基因和HPRT1基因作为人血液中内参基因的应用，首次对进入高原前和持续低氧环境暴露后血液中的内参基因表达稳定性进行检测，得到持续低氧暴露条件下稳定表达的组合内参基因GAPDH和HPRT1，并在实际工作得到运用。本发明GAPDH和HPRT1的组合内参基因在持续低氧刺激后仍可表达稳定，而且能够反应功能基因在不同时间低氧环境刺激下细胞基因表达的变化，可作为定量高原低氧暴露前后血液中目的基因检测的内参基因。

摘要： 本发明公开了一种表达猪丹毒杆菌重组蛋白GAPDH的基因gapdh及重组大肠杆菌与应用。其将猪丹毒杆菌的3‑磷酸甘油醛脱氢酶glyceraldehyde‑3‑phosphate dehydrogenase(GAPDH)基因进行了克隆、表达和纯化。本发明通过与猪丹毒康复猪血清的免疫印迹分析发现重组蛋白GAPDH具有很好的免疫原性。本发明小鼠实验表明重组蛋白GAPDH可以诱导产生高滴度抗体并产生有效保护力。这就为猪丹毒新型疫苗的创制提供了新的候选抗原。