Orexin

摘要： 目的研究脑宁糖浆的镇静催眠作用及其对睡眠剥夺小鼠脑组织睡眠相关神经递质的影响。方法将144只小鼠随机分为正常组,舒乐安定组,脑宁糖浆低、高剂量组,连续灌胃给药14 d后,各组小鼠进行戊巴比妥钠阈下、阈上睡眠实验和自主活动实验等行为学测试。将75只小鼠随机分为正常组,模型组,舒乐安定组,脑宁糖浆低、高剂量组,连续灌胃给药14 d后,采用多平台水环境睡眠剥夺72 h进行造模,造模期间继续给药;采用LC-MS法检测皮层中GABA与5-HT含量,ELISA法检测下丘脑中orexin水平,免疫组化法检测皮层中GABA_(A)R表达,RT-qPCR法检测皮层中GABA_(A)R、5-HT_(1A)R和下丘脑中orexin mRNA表达。结果与正常组比较,舒乐安定组和脑宁糖浆各剂量组睡眠潜伏期、自主活动时间、活动路程、活动速度均缩短(P<0.01),睡眠时间、入睡率均增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠皮层中GABA、5-HT含量和皮层中GABA_(A)R阳性表达、GABA_(A)R及5-HT_(1A)R mRNA表达均降低(P<0.01),下丘脑中orexin水平及mRNA表达均升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组以上指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论脑宁糖浆对睡眠剥夺小鼠具有镇静、催眠作用,其机制可能是通过上调神经递质GABA和5-HT含量,上调GABA_(A)R和5-HT 1A R表达,下调orexin表达实现的。

摘要： 近年来,Orexin能神经元系统作为维持觉醒的关键性神经递质引起了人们的重视,CSF中Orex-in-A水平对发作性睡病的诊断具有重要价值,并且Orexin双受体拮抗剂对失眠有显著疗效.嗜睡是临床上常见的症状,发生率为10％～25％,可严重影响人的身心健康.引起嗜睡的病因多且复杂,但目前尚无评估嗜睡的特异、客观的生物指标.因此,本文就目前国内外关于Orexin系统与嗜睡相关疾病的研究进展进行综述,通过对Orexin及其受体的研究,探索Orexin与嗜睡相关性疾病的关系、诊断价值及应用前景.

摘要： Hypothalamic neuropeptides named hypocretin/orexins which were identified in 1998 regulate critical functions such as wakefulness in the central nervous system.These past 20 years had revealed that orexins/receptors system was also present in the peripheral nervous system where they participated to the regulation of multiple functions including blood pressure regulation,intestinal motility,hormone secretion,lipolyze and reproduction functions.Associated to these peripheral functions,it was found that orexins and their receptors were involved in various diseases such as acute/chronic inflammation,metabolic syndrome and cancers.The present review suggests that orexins or the orexin neural circuitry represent potential therapeutic targets for the treatment of multiple pathologies related to inflammation including intestinal bowel disease,multiple sclerosis and septic shock,obesity and digestive cancers.

摘要： 目的:探索orexin能神经系统是否参与调节老年大鼠异氟醚麻醉觉醒延迟及其具体机制.方法:选择雄性SD大鼠,将其分为老年大鼠组(n=6,20月龄,体重600～800g)和青年大鼠组(n=6,3～4月龄,体重230～250g).采用翻正反射恢复时间作为麻醉觉醒时间,记录异氟醚麻醉下老年大鼠和青年大鼠各自的麻醉觉醒时间;通过免疫荧光染色和细胞计数确定老年大鼠和青年大鼠神经元数目,放射免疫法检测两组大鼠血浆orexin-A含量;Western blot检测老年大鼠和青年大鼠orexin-1和-2受体含量.结果:老年大鼠异氟醚麻醉觉醒时间明显长于青年大鼠(P＜0.05);老年大鼠orexin能神经元的数目与青年大鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05),但其血浆orexin-A含量显著高于青年大鼠(P＜0.05);老年大鼠orexin-1受体在蛋白质表达中明显低于青年大鼠(P＜0.05),而orexin-2受体的表达与青年大鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在老龄化过程中,虽然血浆中orexin-A含量代偿性增加,但是由于全脑中orexin-1受体含量的减少,使其并不能充分发挥促觉醒作用,这可能是导致老年人麻醉苏醒延迟的原因之一.

摘要： 目的:观察orexin能神经元在依托咪脂麻醉中的促觉醒作用.方法:选择雄性SD大鼠36只,体重230～250g.将18只SD大鼠随机分为脂肪乳剂组(60 mg.kg-1·h-1),依托咪脂麻醉(50 mg·kg-1·h-1)30 min组和60 min组(每组n=6),用放射免疫法检测3组大鼠血浆中orexin含量;3天后,将脂肪乳剂组大鼠颈椎脱臼处死后灌注取脑,另外两组在依托咪脂麻醉下灌注取脑,采用免疫荧光双标染色,分别观察3组大鼠orexin神经元活性.另取18只SD大鼠随机分为乳酸林格氏液组,orexin-A 30 pmol组和100pmol组(每组n=6),记录大鼠翻正反射消失时间为麻醉诱导时间及翻正反射恢复时间为觉醒时间.结果:与脂肪乳剂组相比,依托咪脂麻醉30 min和60 min后,血浆orexin-A含量下降(P＜0.05),有活性的orexin神经元数目减少(P＜0.01);与依托咪脂麻醉30min组相比,60 min组有活性的orexin神经元数目减少(P＜0.05),但血浆orexin-A含量与30 min组无差异(P＞0.05);与乳酸林格氏溶液组相比,基底前脑区微注射orexin-A 30 pmol或100 pmol对麻醉诱导无影响,但能显著缩短依托咪脂麻醉觉醒时间(P＜0.05,P＜0.01);但orexin-A 30 pmol组和100 pmol组诱导和觉醒时间比较均无统计学差异(P＞0.05).结论:依托咪脂麻醉抑制大鼠下丘脑orexin神经元的活性,orexin-A对依托咪脂麻醉具有促觉醒作用.

摘要： Objective:To investigate the organization of projections from different subdivisions of the periaqueductal gray (PAG) to orexin-containing neurons in the hypothalamus and to reveal the morphological basis for the modulatory effects of the PAG innervations on orexin-containing neurons in rats.Methods:Cholera toxin B subunit (CTb) injections were made into the orexin-containing neurons field in the hypothalamus of rats and the distributions of CTb-immunoreactive (ir) neurons in the PAG were observed under a light microscope.An combination of biotinylated dextran amine (BDA) injection into different subdivisions of PAG and immunostaining for orexin-containing neurons was implemented,the distribution of BDA-labeled fibers and the orexin-ir neurons was observed in the hypothalamus.Results:After an unilateral CTb injection into suprafornical area or lateral hypothlamus,numerous CTb-ir neurons were observed bilaterally with a ipsilateral predominance in the PAG.The lateral PAG (lPAG) and ventrolateral PAG (vlPAG) contained a large number of CTb-ir neurons,while dorsolateral PAG (dlPAG) and dorsomedial PAG (dmPAG) contained a few labeled neurons.A small number of CTb-ir neurons were seen in the contralateral portions of PAG.After BDA injection into dlPAG,lPAG and vlPAG respectively and immunostaining of orexin-containing neurons,BDA-labeled fibers were observed bilaterally with a clear-cut ipsilateral predominance in the hypothalamus.The prominent overlap of the distribution field of the BDA-labeled fibers and that of the orexin-ir neurons were found in the suprafornical area.In this area,bouton-like varicosities labeled with BDA from lPAG and vlPAG were often closely apposed to cell bodies and dendrites of the orexin-ir neurons.Very sparse apposition of those BDA labeled fibers from dlPAG and orexin-ir neurons were found.Conclusion:Fibers from lPAG and vlPAG and orexin-ir neurons in the suprafornical area of the hypothalamus are overlapping and are closely connected,which may directly affect the functions of orexin-containing neurons.%目的:观察大鼠中脑水管周围灰质(PAG)不同分区神经元发出的投射纤维与下丘脑orexin阳性神经元之间的联系,阐明PAG不同分区神经元支配下丘脑orexin阳性神经元的形态学基础.方法:首先将逆行示踪剂霍乱毒素B(CTb)注射到下丘脑orexin阳性神经元胞体分布区域,免疫组织化学显色观察PAG内CTb逆行标记神经元的分布特点;再将顺行示踪剂生物素化葡聚糖胺(BDA)注射到PAG不同分区,采用免疫组织化学双标记的方法,在下丘脑内观察BDA标记神经纤维及其终末与orexin阳性神经元的重叠分布特点和它们之间的联系.结果:将CTb注射到单侧下丘脑穹窿上区或外侧区后,在注射点同侧PAG的外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)及背内侧区(dmPAG)仅见少量标记神经元.注射点对侧PAG区域也可观察到少量CTb标记神经元.将BDA分别注射到单侧dlPAG、lPAG和vlPAG后,在下丘脑双侧均可观察到BDA顺标纤维及其终末,但注射点同侧BDA标记纤维和终末的数量明显多于对侧.源自lPAG和vlPAG的BDA标记纤维及其终末与orexin神经元胞体在穹窿上区形成明确的重叠分布和密切接触,而源自dlPAG的纤维少见与orexin神经元接触.结论:lPAG及vlPAG来源的纤维及其终末与下丘脑内的orexin阳性神经元的分布区域重叠并形成密切接触,可能直接影响orexin神经元的功能.

摘要： 目的:探讨结节乳头体在小鼠运动和摄食中的作用及机制.方法:选择雄性ddy小鼠, 180-200 g, 通过单侧植入电极损毁TMN-E2区.采用荧光金逆行追踪方法检测小鼠Me5与TMN之间的神经纤维联系;采用免疫组化方法检测小鼠TMN中组氨酸脱羧酶 (HDC) 免疫反应阳性细胞数;采用旷场试验箱记录小鼠全天、夜间以及白天的自主活动和摄食摄水;采用PCR检测小鼠穹窿周和下丘脑外侧区的orexin m RNA的表达.结果:荧光金逆行追踪实验显示小鼠Me5可向TMN-E2发出神经纤维投射.单侧TMN损毁, 两侧TMN中HDC反应阳性细胞显著减少 (P＜0.05), 且损毁侧比未损毁侧HDC免疫反应阳性细胞数减少 (P＜0.05).TMN损毁对小鼠24 h自主活动和摄食摄水无明显影响.单侧TMN损毁, 小鼠从暗期到光期的自主活动和摄食摄水显著减少 (P＜0.05).单侧TMN损毁, 小鼠正常昼夜活动摄食节律无显著改变.单侧TMN损毁, 小鼠穹隆周和下丘脑外侧区白天的orexin m RNA表达显著减少 (P＜0.05).结论:Me5与TMN之间存在神经通路, 该通路可能通过调节穹隆周区或下丘脑外侧区的orexin神经元的激活从而调控摄食及相关行为的昼夜节律.%Objective: Study on the role and mechanism of tuberomammillary nucleus in the locomotor activity and feeding of mice. Methods: The male ddy mice, 180-200 g, and implantation electrode was used to destroy the unilateral TMN-E2 area. Using Fluorogold retrograde tracing method, the neural connection between Me5 and TMN mice were detected; Immunohistochemistry method was used to record the histidine decarboxylase (HDC) immunoreactive cell number in TMN; The open field system was used to record the locomotor activitiey and food intake and water intake in 24 h, light and dark phases. PCR was used to record the expression of orexin m RNA in the peripheral fornix and the lateral hypothalamus of mice. Results: The fluorogold retrograde tracing experiment showed that the Me5 could send nerve fiber projection to TMN-E2 in mice.In unilateral lesioned TMN, the HDC response positive cells in both sides of TMN were significantly reduced (P＜0.05), and the number of HDC immunoreactive cells in the lesioned side was lower than that on the undamaged side (P ＜0.05). Unilateral TMN lesion had no significant effect on the locomotor activitiey and food intake and water intake in 24 h. The locomotor activitiey and food intake and water intake of miceduring the dark phase before the onset of the light phasedecreased significantly after unilateral TMN lesion (P＜0.05). There was no significant change in the normal circadian rhythms of day and night activity in mice with unilateral TMN lesion. The expression of orexin m RNA in the PFA and the lateral hypothalamus in the daytime of the unilateral TMN was significantly reduced (P＜0.05). Conclusions: There is a neural pathway between Me5 and TMN.This pathway may regulate the circadian rhythm of feeding and related behaviors by regulating the activation of orexin neuron in the PFA and hypothalamus lateral area.

摘要： 目的 观察orexin对急性酒精中毒昏迷大鼠是否有促觉醒作用.方法 30只大鼠随机分为对照组和生理盐水组,orexin-A和orexin-B组(2 nmol),SB334867和TCS-OX2-29组(10 nmol) (n=5),观察腹腔注射各种药物对大鼠昏迷时间的影响.另取30只大鼠随机分为对照组,生理盐水组,orexin-A和orexin-B组(2 nmol和4 nmol)(n=5),观察腹腔注射不同剂量的orexins对昏迷大鼠8脑电波的影响.结果 与对照组觉醒时间(3.49±0.08)h相比,腹腔注射orexin-A和orexin-B使大鼠昏迷时间缩短为(2.20±0.13)h和(2.47±0.07)h(P ＜0.01);SB334867和TCS-OX2-29延长大鼠昏迷时间为(4.30±0.12)h和(3.79±0.10)h(P＜O.01).脑电结果显示:与对照组96.0％±3.2％相比,2 nmol和4 nmol orexin-A使δ波百分比分别下降为80.8％±3.3％和76.5％±2.9％(P＜0.01);2 nmol和4 nmol orexin-B使δ波百分比分别下降为85.0％±3.2％和80.3％±3.1％(P＜0.01).结论 Orexin可促进急性酒精中毒昏迷大鼠的觉醒.

摘要： 本发明公开了增食欲素(Orexin)防治晕动症的用途；具体涉及增食欲素Orexin在制备预防和/或治疗晕动症，或缓解晕动症症状药物中的用途。本发明经动物实验证实增食欲素Orexin可缓解晕动症引起的恶心呕吐，抑制排便反应，改善摄食减少、体温降低及自发活动量减少，其对晕动症具有较好的防治作用，可用于开发抗晕动刺激、眩晕、妊娠、化疗引起的恶心呕吐，改善嗜睡和发作性嗜睡，促进觉醒，改善食欲和胃肠功能，维持体温等药物。

摘要： 本发明公开了一种Orexin多肽的化学制备方法，包括以下步骤：制备氨基酸，利用氢氧化铵将其活化成活性中间体；制备聚酰胺树脂，选择性保护侧链官能团，然后开始进入AA循环，开始合成含有33个氨基酸的线性粗肽多肽；利用过硫酸盐将线性粗肽多肽氧化形成第一对二硫键，利用碘化钾形成第二对二硫键，得到环化的Orexin多肽溶液；将环化的Orexin多肽溶液经盐析与有机溶剂沉淀后进行分离，将分离出的盐经冷冻干燥后得到Orexin多肽。本发明提出的一种Orexin多肽的化学制备方法，周期短，操作简单，产物分子量高，毒副作用小，可应用于制备促进全身麻醉觉醒药物或促进全身麻醉觉醒药物的前体化合物，成本低，值得推广。

摘要： 本发明公开了一种Orexin‑A聚乙二醇化修饰物制备及用途，包括以下步骤：S1：将摩尔比为3：8‑3：80的Orexin‑A和巯基乙酸聚乙二醇酯、甲氧基聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇丙醛加入反应容器中；S2：控制反应容器内的PH值为5‑10，然后将应容器内的温度升温至20‑50°C，反应10‑25h后，向反应容器内加入小分子活性肽，接着在40‑45°C下反应6‑10h后，终止反应，得到反应物；S3：将反应物用色谱柱除盐，然后将除盐后收集的蛋白用阴离子交换柱进行离子交换反应，接着用10‑15mM PB缓冲液洗脱后，收集洗脱峰，再将洗脱峰进行浓缩并冷冻干燥。本发明制备的Orexin‑A聚乙二醇化修饰物能够保留原有蛋白活性，未改变原有蛋白的功能，产物均一性好，分离纯化简单，方法简单，使用方便，成本低。

摘要： 本发明公开了斜带石斑鱼orexin‑A在调控石斑鱼糖代谢中的应用。本发明通过研究发现orexin‑A基因对石斑鱼糖代谢具有调控功能。在发现糖代谢功能的基础上，本实验室利用大肠杆菌原核表达系统获得了大量粗提级别的重组石斑鱼orexin‑A，并将其添加到石斑鱼饲料中进行生理实验研究其对石斑鱼生长的影响；利用本发明可以获得来源稳定、成本低廉的石斑鱼orexin‑A重组蛋白，并进一步制备适合海水鱼类使用的鱼类促生长剂或添加剂。

摘要： 本发明公开了一种orexin多肽的化学规模化合成方法，其包括下述步骤：（1）采用Rink Amide Resin法合成线性粗肽制备树脂。（2）进入AA循环，将步骤（1）所得的反应产物，采用固相合成法，按序逐一合成，得到33个氨基酸的线性粗肽。（3）将步骤2所得的线性粗肽，先用双氧水氧化形成6和12位间的第一对二硫键，然后利用碘剂直接形成7和14位间的第二对二硫键，得环化的orexin粗肽溶液。（4）将步骤3所得的环化的orexin粗肽溶液经分离性HPLC纯化、转盐及冷冻干燥后，得到orexin多肽。（5）利用Kaiser检测法和HPLC‑MS法，完成步骤4所得orexin多肽的结构和纯度测定。由于orexin多肽是正常存在于人体中的一种神经多肽，因此就开发成药品的角度而言，其具有毒副作用小，对正常生理功能干扰小等独特优势。

摘要： 本发明公开了一种orexin-A载药脂质体的制备方法及用于治疗发作性睡眠的药剂，所述orexin-A载药脂质体的制备方法包括下述步骤：a.将orexin-A多肽准确称量，用磷酸盐缓冲液配制成20μg/ml的orexin-A原液；b.称取一定量的卵磷脂、胆固醇、膜材PEG2000-DSPE，溶解于三氯甲烷中得到混合液；c.将上述混合液在常温水浴减压旋转蒸发；d.蒸干物中滴加磷酸盐缓冲液，制得水性混悬液；e.用对水性混悬液超声3～5min，冷至室温；将步骤a所得orexin-A原液加入超声后的水性混悬液中室温下磁力搅拌30min，0.45μm滤膜过滤2次，即得orexin-A载药脂质体。对该orexin-A载药脂质体进行冷冻干燥即得治疗发作性睡眠的鼻喷剂：将该鼻喷剂溶于生理盐水中即得静脉注射剂。

摘要： 本发明公开了一种大菱鲆增食欲素Orexin基因、重组蛋白及其制备方法。本发明克隆得到了增食欲素的编码基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2，大菱鲆增食欲素Orexin多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。将增食欲素Orexin基因与PET‑24a表达载体相连接构建表达载体pET‑24a‑orexin，转化入表达菌株进行原核表达，后经纯化复性获得大菱鲆增食欲素重组蛋白，本发明将为研究大菱鲆的食欲调控机理和开发可应用于生产的促进鱼类摄食和生长的新产品打下良好基础。

摘要： 本发明公开了一种orexin多肽的化学规模化合成方法，其包括下述步骤：（1）采用RinkAmideResin法合成线性粗肽制备树脂。（2）进入AA循环，将步骤（1）所得的反应产物，采用固相合成法，按序逐一合成，得到33个氨基酸的线性粗肽。（3）将步骤2所得的线性粗肽，先用双氧水氧化形成6和12位间的第一对二硫键，然后利用碘剂直接形成7和14位间的第二对二硫键，得环化的orexin粗肽溶液。（4）将步骤3所得的环化的orexin粗肽溶液经分离性HPLC纯化、转盐及冷冻干燥后，得到orexin多肽。（5）利用Kaiser检测法和HPLC-MS法，完成步骤4所得orexin多肽的结构和纯度测定。由于orexin多肽是正常存在于人体中的一种神经多肽，因此就开发成药品的角度而言，其具有毒副作用小，对正常生理功能干扰小等独特优势。

摘要： 本发明公开了一种通过orexin-A的N末端氨基共价键与聚乙二醇相连接的orexin-A聚乙二醇化修饰物，其制备方法为：将摩尔比为1:5-1:50的orexin-A与单甲氧基聚乙二醇丙醛或单氧基聚乙二醇琥珀酰胺碳酸脂在pH为4-9、温度为4-37°C条件下反应0.5-24小时后，加入小分子氨基酸终止反应；将第一步骤得到的反应产物经过SepHadex G-50色谱柱除盐，将除盐后收集的蛋白上样于QAE-SepHadex A-50阴离子交换柱，用10mM PB缓冲液洗脱，收集洗脱峰，浓缩并冷冻干燥，即得orexin-A聚乙二醇化修饰物。所述的修饰物稳定性好，半衰期长，毒副作用小。

摘要： 本发明公开了斜带石斑鱼orexin-A在调控石斑鱼糖代谢中的应用。本发明通过研究发现orexin-A基因对石斑鱼糖代谢具有调控功能。在发现糖代谢功能的基础上，本实验室利用大肠杆菌原核表达系统获得了大量粗提级别的重组石斑鱼orexin-A，并将其添加到石斑鱼饲料中进行生理实验研究其对石斑鱼生长的影响；利用本发明可以获得来源稳定、成本低廉的石斑鱼orexin-A重组蛋白，并进一步制备适合海水鱼类使用的鱼类促生长剂或添加剂。