花粉管

摘要： [目的]本文旨在对梨单糖转运蛋白(sugar transporter protein,STP)基因家族成员进行鉴定,分析其序列特性、基因结构、氨基酸序列保守功能域、染色体定位以及组织表达特性,为其功能研究奠定基础。[方法]基于梨的全基因组数据,采用生物信息学方法进行序列鉴定和分析。通过不同糖种类和浓度培养梨花粉来分析糖对花粉管生长的影响。利用转录组数据分析PbrSTP成员在花粉不同发育阶段的表达模式。通过亚细胞定位技术分析PbrSTP11在细胞中的分布情况,并利用反义寡聚脱氧核苷酸(as-ODN)技术和缺陷型酵母突变体验证PbrSTP11的功能。[结果]梨STP基因家族有35个成员,分为5个亚家族,各亚家族具有保守的基因结构和蛋白质基序。与无糖、葡萄糖和果糖培养基相比,含蔗糖的培养基对梨花粉的萌发和生长均具有显著的促进作用,而低浓度的单糖培养基也会促进梨花粉的萌发和生长,但其作用没有蔗糖显著。RT-qPCR结果表明,PbrSTP11基因在梨花粉中特异性表达。随着单糖浓度的升高,PbrSTP11基因的表达水平显著提高。亚细胞定位显示PbrSTP11蛋白定位在细胞膜上。酵母功能互补试验结果显示,PbrSTP11对葡萄糖、果糖具有转运能力,并且对葡萄糖的转运能力高于果糖,但PbrSTP11没有转运蔗糖和山梨醇的活性。利用as-ODN技术敲低PbrSTP11基因表达抑制了梨花粉管生长。[结论]PbrSTP基因家族成员高度保守;PbrSTP11定位于质膜,具有转运葡萄糖和果糖的能力,从而促进梨花粉管生长。

摘要： 为了比较裸子植物和被子植物花粉管生长机制,本研究利用激光共聚焦显微镜、全内反射荧光显微镜、透射电子显微镜观测比较了青杄、雪松、烟草和百合花粉管中FM4-64染色的时间变化特性和波动特性、囊泡移动速度、单位时间内细胞壁体积的增加,结果发现:与被子植物烟草和百合花粉管相比,裸子植物青杄和雪松花粉管中FM4-64荧光强度前期增加速度慢,后期降低速度慢,表明裸子植物花粉管的胞吞和胞吐速率明显低于被子植物花粉管。其次,裸子植物中的青杄和雪松花粉管中分别只有28%和34%的囊泡在移动,且多数囊泡移动速度小于被子植物烟草和百合花粉管,揭示了裸子植物花粉管中单位时间内能移动到顶端进行胞吐作用的囊泡的数量要少于被子植物的。然而裸子植物青杄和雪松花粉管单位时间内需要增加的细胞壁体积大于被子植物烟草花粉管。这些结果暗示着来自囊泡的细胞壁前体物质的积累对裸子植物和被子植物花粉管顶端细胞壁的增加的贡献是不同的。

摘要： [目的]明晰牡丹种间远缘杂交不亲和的细胞学及生理机制,为牡丹远缘杂交提供理论及试验基础。[方法]以牡丹‘凤丹’为母本,保康牡丹为父本,进行远缘杂交授粉亲和性研究,探讨授粉后雌蕊保护酶活性、可溶性物质含量及内源激素含量变化与花粉萌发、花粉管生长之间的联系。[结果]保康牡丹与‘凤丹’远缘杂交亲和性差的细胞学原因是花粉萌发慢,花粉管多有胼胝质沉积、扭曲缠绕严重,生长多无序并伴有分枝现象,只部分能穿过花柱到达子房。生理机制研究结果表明:授粉后,SOD活性快速升高有利于花粉柱头识别及花粉管生长;MDA含量快速增加不利于远缘杂交授粉花粉管的伸长生长;远缘杂交雌蕊较自交雌蕊可溶性蛋白及可溶性糖含量高,表现为柱头识别作用及雌蕊排异作用加强;自交雌蕊IAA含量显著高于杂交,高水平IAA、GA3、IPA有助于花粉萌发及花粉管生长;远缘杂交雌蕊ABA含量显著高于自交雌蕊,高水平ABA、JA对花粉管生长显示抑制作用,诱发胼胝质沉积,花粉管扭曲缠绕生长无序。[结论]‘凤丹’与保康牡丹远缘杂交存在受精前障碍,其与雌蕊内部酶活性变化、内源激素含量的动态变化及可溶性物质含量密切相关。

摘要： 【目的】为探究板栗花粉萌发培养基以及乙二醇二乙醚二胺四乙酸对板栗花粉管发育的影响,明确Ca^(2+)在花粉萌发中的作用。【方法】以处于盛花期的‘燕山红栗’花粉为试材,首先筛选花粉萌发培养基配方,随后以此为基础添加不同浓度的乙二醇二乙醚二胺四乙酸,观察乙二醇二乙醚二胺四乙酸对花粉萌发和花粉管伸长以及纤维素和胼胝质分布的影响。【结果】板栗花粉最适宜离体萌发培养基为7.5%蔗糖、0.0010%H_(3)BO_(3)、0.004%CaCl_(2)和1%琼脂,34°C培养36 h,此时花粉萌发率最高为34.01%;添加乙二醇二乙醚二胺四乙酸后,花粉管伸长受阻,当乙二醇二乙醚二胺四乙酸浓度为800μmol/L时,花粉管顶端出现较多的纤维素和胼胝质沉积。【结论】乙二醇二乙醚二胺四乙酸抑制花粉萌发及花粉管伸长,同时导致花粉管的纤维素和胼胝质分布异常,该研究为揭示板栗花粉响应胁迫的应答机制及花粉萌发和花粉管发育机理提供新的思路。

摘要： 通过对川中丘陵区引种的三个美国紫薇品种(Red Rocket、E.Ember、Delta Blush)进行花期观测与及其花粉萌发能力比较。结果表明:3种紫薇均在7月底或8月上旬进入开花期,花期可遇,花期少于原引种地——湖南;3个品种的长/短花丝花药中的花粉粒均能正常萌发,长花丝花药中的花粉粒萌发率更高,因此,两类花药均可为杂交供花粉;3个品种均可自交和异交,自交时,花粉管和精细胞12 h可进入子房,异交时,花粉管则需要14~18 h,相关研究为下一步的杂交试验的开展奠定了基础。

摘要： 在多数高等植物中,花粉粒通过虫媒或(和)风媒到达植物雌花柱头,花粉粒在柱头吸水萌发后,穿过花柱组织,最终花粉管将两个精细胞传递给雌配子体,从而实现双受精作用.在受精过程中,花粉管必须穿透柱头并在花柱组织中生长,最后到达胚珠的珠囊,这一定向生长过程需要十分精确的调控.本文就花粉管的激活和引导研究进展进行了综述,并对今后的研究提出展望.

摘要： 只要提供足够的光线与水,种子就会发芽。很快的,植物的根和叶子就会长大,并长出茎。多数植物在茎的项端开花。花通常有雄蕊和雌蕊,花粉传播到雌蕊柱头后,通过花粉管让精子和胚珠中的卵结合,就可能结出果实和种子。种子发芽、成长、开花、产出种子到死亡的过程,就叫作“植物的生命周期”。植物有不同类型的生命周期,一年生植物通常在春天发芽,秋天死去;多年生植物则会连续多年发芽结果。

摘要： 几乎所有中文植物学教材都把花粉管当成是种子植物对受精摆脱水束缚的适应特征,并得出粉管受精使种子植物更适应于陆生生活的结论.但是,某些灭绝的(种子蕨和科得荻植物)和一些现存的(银杏和苏铁)裸子植物行游动受精,需要特别指出的是其受精并不需要液态水.种子蕨和科得荻植物不形成花粉管,银杏和苏铁的花粉管是吸器而无输送精子的功能.其实,正是小孢子在小孢子囊中的原位发育导致植物演化出花粉和传粉,花粉的形成及其传播才使受精真正摆脱了水的限制.澄清花粉管的功能可作为植物学批判性教学的案例,以促进学生们科学精神和科学思维的发展.

摘要： [目的]豆科牧草苜蓿、小冠花和百脉根异花授粉,胚珠败育现象显著,种子实际产量远低于理论产量,但有关其授粉后的花粉管引导和受精后胚胎发育的基础数据缺乏.[方法]采用人工授粉方法,对3种豆科牧草花粉管引导和胚胎发育进行荧光显微观察,并结合田间数据进行胚珠败育统计分析.[结果]3种牧草柱头授粉最佳时期为花药开裂阶段,柱头角质层是其花粉管穿入花柱的机械屏障;苜蓿授粉2h后花粉萌发,8 h后花粉管生长并到达胚珠,24 h后75％的胚珠处有花粉管到达;小冠花和百脉根花粉管萌发生长到达胚珠的时间比苜蓿快,授粉4 h后即观察到花粉管生长到达胚珠,8 h后2种牧草96％和100％的胚珠处均有花粉管分布.进一步的荚果结实观察发现:苜蓿、小冠花和百脉根授粉后胚珠败育严重,平均败育率分别为87.67％、78.00％和81.33％,荚果内败育胚珠的位置具有随机性.以上结果表明:授粉后不同牧草花粉萌发和花粉管生长速率明显不同,尽管小冠花和百脉根的花柱比苜蓿长,其花粉管生长引导速度比苜蓿快;从到达胚珠的花粉管数量来看,3种牧草花粉数量均可满足其胚珠受精需要.[结论]3种豆科牧草胚珠败育并非由于受精前的花粉萌发和花粉管引导限制,而是和受精后的胚胎发育受阻有关.

摘要： 本文通过比较0.3％细胞外钙浓度下生长的和正常培养基下生长的百合花粉管中F4-64荧光波动特性,研究花粉管顶端FM4-64波动机制.结果发现在0.3％外钙浓度下,花粉管中FM4-64波动平均频率减少为对照花粉管的38％,几乎等于花粉管生长速度减少的值;FM4-64波动的平均振幅增大为对照花粉管中的1.84倍,接近于囊泡胞吐速率增大值(1.42)和单位时间内增加的花粉管内腔体积的减小值(0.48)之和.而在同一根花粉管中越靠近顶端部位FM4-64波动振幅和周期越大.这些结果暗示着花粉管生长速度和囊泡向顶端的聚集速度是调节FM4-64波动周期的重要因素;胞吐速率、花粉管内腔体积的变化速率和顶端囊泡密度是调节FM4-64波动振幅的重要因素.

摘要： 采用花粉离体培养法,研究不同的温度、光照及培养基组分对蒿柳花粉萌发的影响.结果表明:培养温度和光照强度均影响蒿柳花粉萌发率和花粉管长度,20～25°C是蒿柳花粉萌发的最适温度区间,1500lx和2000lx是蒿柳花粉萌发的最佳光照强度.正交试验中,一定浓度的蔗糖、H3BO3及pH值均可显著影响蒿柳花粉萌发,3个因子最佳组合为蔗糖100g·L-1+H3BO3200mg·L-1+pH5.0,在光照强度为1000lx,温度为25°C时,萌发率高于48.8％.利用试验筛选出的蒿柳花粉最佳离体培养组合培养花粉,并与花粉在柱头上活体萌发相比较,二者花粉管长度无显著差异.

摘要： 本研究以14个枣树品种花粉为材料,采用过氧化物酶染色法和花粉离体培养法,并结合显微镜镜检,对相同培养基条件下花粉萌发率和花粉管长度进行了研究.结果表明:供试品种花粉量、花粉管长度、萌发率和生活力有明显差异,花粉生活力与花粉萌发率呈正相关性,而花粉量和花粉管长度与花粉萌发率无明显相关性.

摘要： 为阐明温度对枇杷花粉原位萌发、花粉管生长和胚囊寿命的影响,明确枇杷花粉萌发、花粉管生长的最适温度,为枇杷花期管理及生态区划提供新的科学依据.以'大五星'为试材,将其离体花枝置于不同温度的恒温箱中进行培养,用'龙泉5号'进行异花授粉,授粉后不同时间段分别采集花朵,采用荧光显微观察方法观察统计花粉萌发和花粉管生长和胚囊活力情况.结果表明,在10.0、15.0和20.0°C的温度条件下花粉萌发率、被花粉管生长穿过的花柱比率和有花粉管的胚珠比率显著高于其他温度,当温度为5.0°C条件时花粉的萌发率仅约为10％,温度升高至25.0和30.0°C时,萌发率又分别显著下降至约65％和45％.当温度为5.0和30.0°C时,在授粉后120h均未发现有花粉管穿过花柱生长至胚珠.上述结果表明温度对枇杷花粉萌发、花粉管生长和胚囊寿命有显猪影响,回归分析结果表明枇杷花粉萌发的最适温度为19.9°C,花粉管最适宜的生长温度为18.0°C.

摘要： 玉米的组织培养受基因型和受体范围的限制比较大,因此成功应用于其它植物的常规转基因方法如农杆菌法、基因枪法等在玉米的转化受到很大的限制.国内科学家周光宇认为植物受精卵或其前后的生殖细胞处于未形成细胞壁的类似"原生质体"状态,正进行活跃的DNA复制、分离和重组,这时很容易将外源DNA片段整合到受体基因组中,以达到遗传转化的目的.另一方面，细胞穿膜肽Tat2具有保护DNA不被降解和携带DNA穿膜进入细胞核的特性，本项目正是基于以上事实，首次将细胞穿膜肽Tat2应用于玉米花粉管通道转化法研究，将线性DNA结合细胞穿膜肽Tat2通过花粉管通道整合进玉米基因组中，用于提高花粉管通道法转化效率。经三年试验统计，转化效率稳定在1％-2%之间，3:1分离比的转基因株系占总数的16％。

摘要： 花粉管在花柱中生长受多个信号分子调控,钙离子在其中作用显著.钙是一种重要的第二信使,它将外界的多种生物或非生物信息转化为对细胞内基因表达以及细胞生理反应的调控.钙信号的表达方式是胞内自由钙浓度的特异性变化.本文概述了近年来花粉管生长中钙信号特性及其调控的研究进展,主要内容包括花粉管尖端自由钙离子浓度梯度与胞内钙振荡、花粉管质膜钙转运体的鉴定及其调控特性等.这可为深入开展相关研究提供参考.

摘要： 本试验在英吉沙恰克园以"纸皮"、"双果"、"克西"、"麻壳"、"267"五个扁桃品种进行授粉试验,结果表明自然条件下五个品种的坐果率为9.82％～33.56％之间.果园放蜂条件下,坐果率至少比无蜂条件下提高10％.自交条件下除了"双果"的坐果率达到23.75％,其余都未超过8％.杂交组合中"纸皮"×"267"的坐果率优势最为明显,为68.09％.荧光显微观察表明:花粉在柱头都能萌发,授粉24～48h后异交组合的花粉管生长已经到达胚珠,而自交组合花粉管在花柱1/4～1/3处即停止生长,表明抑制花粉管生长的部位在花柱中上部,亲和性的不同导致了花粉管生长速度的差异.

摘要： 采用花粉离体萌发法研究不同培养基组分和培养条件对桃花粉萌发和花粉管生长的影响，同时对不同贮藏温度下的桃花粉寿命进行研究。结果表明：固体培养基与液体培养基对桃的花粉萌发率和花粉管长度影响差异不显著；10％蔗糖是大多数桃品种花粉的最适萌发条件；硼能提高桃花粉的萌发率，但对花粉管的生长没有促进作用：桃花粉在20～25°C的培养温度下萌发率最高，花粉管生长最长；桃花粉萌发率和花粉管长度在培养前3h内上升最快，3～5h上升趋势减弱，5h后基本停止；随着贮藏温度的升高和贮藏时间的延长，花粉生活力呈降低的趋势。

摘要： 利用光学显微镜和激光共聚焦显微镜分别观察了钙离子浓度的变化对梨花粉萌发和花粉管生长、花粉和花粉管内微丝骨架结构与分布的影响.结果表明:花粉培养基中高浓度(10-1mol/L)或低浓度的Ca2+(＜10-4mol/L)均抑制了梨的花粉萌发和花粉管生长,只有当花粉培养基中的Ca2+浓度(10-3mol/L)达到一定范围内,花粉和花粉管才能正常萌发和生长;低浓度钙离子载体A23187(2.5μmol/L)能促进花粉萌发和花粉管生长,而高浓度(＞5μmol/L)抑制花粉萌发和生长;钙离子螯合剂EGTA和钙离子通道抑制剂Verapamil均抑制了梨花粉的萌发和花粉管的生长,并且抑制效果随浓度的增加而增强.花粉或花粉管内高浓度和低浓度的钙离子均会引起其内部微丝骨架解聚;而自花授粉后的花粉及花粉管内,钙离子浓度也呈现上升趋势,并且肌动蛋白发生解聚.这些结果表明适当浓度的钙离子是花粉萌发和花粉管生长所必需的,而高浓度钙离子对花粉萌发与花粉管生长具有抑制作用,并且通过调控其内微丝骨架的结构与分布来实现其抑制作用.在梨自交不亲和性反应过程中,自花花柱S-RNase也可能是通过花粉及花粉管内钙离子浓度的升高来降解其内微丝骨架,进而抑制花粉的萌发和花粉管的生长.

摘要： 以美味猕猴桃(Actinidia chinensis var.diliciosa)'徐香'与长果猕猴桃(Actinidia longicarpa)进行远缘杂交,利用荧光显微镜观察了花粉管行为,常规石蜡切片法观察了受精及胚发育过程的差异,统计了杂交当代种子数量和坐果率.结果表明,种间杂交长果猕猴桃的花粉粒能在美味猕猴桃'徐香'柱头的乳突细胞表面萌发、生长,但生长速度比对照的缓慢;花粉管在花柱中生长时出现波纹状弯曲、停止生长、胼胝质沿管壁不规则沉积等现象;受精过程延迟;胚胎发育出现异常;坐果率较低.种子总数明显少于种内杂交和种内自然授粉的数量,但正常种子的质量与后者大致相同。

摘要： 有性生殖是被子植物进化中一个极其重要的过程。在这个过程中首先要能够形成成熟的花粉，其次花粉还必须正常萌发，才能将雄配子体运送到雌配子体中完成双受精。其中，花粉管的萌发起着决定性的作用。本文主要介绍了Zm908p11基因在花粉萌发中的功能研究，由实验结果推测Zm908p11可能通过与花粉管中微管微丝相关调控蛋白的互作，在花粉萌发中起作用。

摘要： 本发明公开了一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用。该蛋白，是如下1)或2)的蛋白质：1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与花粉萌发和/或花粉管生长相关的由1)衍生的蛋白质。本发明的与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因可用于植物的遗传转化研究，提高植物的花粉萌发率和/或花粉管生长速度、提高植物的生殖效率、缩短育种进程，对于生长发育缓慢的木本类植物进行生殖发育调控、基因工程育种、加速木本类植物的遗传改良具有重要的理论及实际意义。

摘要： 本发明公开了一种高效、高清晰度的观察植物花粉管在雌蕊内生长情况的荧光显微方法。本发明的荧光显微方法大大地弱化了雌蕊自身组织发光的现象，减少了其在较大放大倍数时对花粉管观察的干扰，从而容易取得高放大倍数下花粉管体内生长的高清晰度的影像，对细节的呈现效果非常理想。本发明的荧光显微方法将软化透明时间极大地缩短至几个小时，且染色的时间也从现有技术的数小时缩短至几分钟，使得观察实验在1天内即可完成，大幅地提高了实验效率，同时避免了使用高浓度的NaOH溶液，软化透明过程中材料大小能保持原始状态，故不会出现失水收缩的现象也无需进行复水处理。

摘要： 本发明公开了一种从梨花粉管中提取纤维素的方法。该方法通过体外培养花粉，对花粉管纤维素的粗提取、有机试剂对纤维素的纯化、蒽酮比色法测定纤维素含量定。通过本发明的方法，对于研究花粉管的生长、花粉管细胞壁组成成分含量、细胞骨架、纤维素合成酶的翻译后修饰、转录因子调控、外界环境因素及激素等方面的因素影响下花粉管细胞壁纤维素对应含量变化具有重要意义。同时本发明中所涉及到的花粉管提取纤维素的方法可用于其他蔷薇科植物，其他不同品种可以借鉴使用。

摘要： 本发明公开了一个水稻花粉管生长相关基因OsPTD1(Pollen Tube Development)及应用。该基因编码的蛋白为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，或经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸且具有与OsPTD1蛋白功能相同的蛋白质；SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成的蛋白质，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明公开的OsPTD1基因编码一个抗坏血酸氧化酶，为花粉管正常生长的必需基因，该基因功能的异常会导致花粉管提前破裂，不能完成授精，产生配子体雄性不育，可用于制备配子体雄性不育，在防止转基因随花粉漂移和繁殖孢子体雄性核不育等方面具有重要作用。

摘要： 本发明提供了一种梨花粉和花粉管微丝骨架的荧光标记方法，属于生物技术领域。包括采集成熟花粉，在培养基中分别培养花粉0.5h和2h，用新鲜的花粉培养基配制的200μmol/L MBS(顺丁烯酰胺苯甲酸－N－琥珀酸酯)预固定5－10min后分别用2％多聚甲醛和4％多聚甲醛各固定0.5h，洗涤花粉(管)，用终浓度为5μg/ml[含5％DMSO(二甲基亚砜)]的FITC－ph染色液(异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽染色液)，在25°C避光下染色0.5－1h，微丝骨架被荧光标记。本发明具有操作简单、快速、标记效果好、对微丝骨架结构破坏小等特点，可用于蔷薇科植物花粉(管)的开发利用，实际应用价值高。

摘要： 本发明公开了一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用。该蛋白，是如下1)或2)的蛋白质：1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与花粉萌发和/或花粉管生长相关的由1)衍生的蛋白质。本发明的与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因可用于植物的遗传转化研究，提高植物的花粉萌发率和/或花粉管生长速度、提高植物的生殖效率、缩短育种进程，对于生长发育缓慢的木本类植物进行生殖发育调控、基因工程育种、加速木本类植物的遗传改良具有重要的理论及实际意义。

摘要： 本发明提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法，所述硫氧还蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。所述硫氧还蛋白为含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重组表达质粒pETrx转化大肠杆菌DH5α获得的重组蛋白。通过用上述序列表的硫氧还蛋白能够有效提升花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长。此外，本申请还提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白的制备方法，该方法能够精确的制得硫氧还蛋白，方便硫氧还蛋白的使用。

摘要： 本发明提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法，所述硫氧还蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。所述硫氧还蛋白为含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重组表达质粒pETrx转化大肠杆菌DH5α获得的重组蛋白。通过用上述序列表的硫氧还蛋白能够有效提升花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长。此外，本申请还提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白的制备方法，该方法能够精确的制得硫氧还蛋白，方便硫氧还蛋白的使用。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种澳洲坚果花粉管生长行为观测方法。具体包括如下步骤：(1)将授粉后的雌蕊浸没于固定液中固定；(2)将雌蕊浸泡于酒精溶液中，然后洗涤；(3)将雌蕊与NaOH溶液混合软化、洗涤、吸干水分；(4)将雌蕊浸泡在磷酸缓冲液中；(5)将雌蕊于中间位置进行横切，使雌蕊上半部柱头与下半部子房分开，然后再纵切成两半，再次放入磷酸缓冲液中浸泡；(6)将雌蕊吸干水分后用染色剂染色、镜检。本发明的荧光显微方法极大地弱化了雌蕊自身组织发光的现象，容易获得花粉管在雌蕊内生长的高清晰度影像，对花粉管生长行为的呈现效果非常理想，可用于澳洲坚果品种间杂交亲和性评价，实际应用价值高。

摘要： 本发明属于玉米转基因技术领域，具体为一种借助花粉管通道在玉米中实现基因编辑的方法，包括步骤一：玉米果穗选取，选取自授粉后的24‑28h，抽丝期一致的玉米果穗；步骤二：基因编辑质粒的制备；步骤三：花粉介导转化：借助花粉管通道将基因编辑载体导入，用待转化的质粒溶液处理花粉粒，使花粉粒携带含有Cas9基因和sgRNA的质粒，然后授粉；步骤四：后代材料的抗性筛选；步骤五：后代遗传性特征研究和PCR检测结果，本发明利用花粉管进入胚囊时所形成的通道，将外源DNA导入受体，实现基因编辑，具有无基因型限制和易于实现大规模转化的特点，可以对玉米实现基因编辑，而且不需要昂贵的仪器设备和繁复的组织培养，并省去了组织培养过程。