3T3细胞

摘要： 目的复方茜草增色液是根据我院临床经验方制备的搽剂,对治疗白癜风有很好的疗效,本研究采用体外BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验,评价复方茜草增色液是否具有光毒性。方法通过对比BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验中阳性对照(盐酸氯丙嗪)与受试样品在有光照及无光照两种条件下的细胞活性、IC_(50)值、光刺激因子(PIF)和平均光效应(MPE),对样品产生光毒性的情况进行预测。结果阳性对照盐酸氯丙嗪出现明显的光毒性反应,而复方茜草增色液在有光照及无光照条件下,其PIF值均为*1,MPE值为-0.088<0.1,光毒性反应为阴性。结论表明复方茜草增色液在本试验条件下对BALB/c 3T3细胞无光毒性产生,安全性良好。

摘要： 目的 比较2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果的影响.方法 参照化学品体外3T3中性红摄取光毒性试验指导原则(OECD 432),采用模拟阳光光源和紫外光源对6种参考物质进行试验.结果 6种参考物质在2种光源照射后其光刺激因子和平均光效应均接近OECD 432中的参考值,各个物质在无光和有光下的IC50值也相近.结论 2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果基本无影响.

摘要： 目的：通过优化条件培养基用于非牙源性上皮细胞的体外扩增，为进一步开展组织工程牙提供上皮种子细胞来源奠定基础。方法：获取出生后1 d C57BL 鼠原代口腔黏膜上皮细胞，接种于含有 Y27632的上皮条件培养基的培养瓶内。细胞长满后，消化传代，采用条件培养基与3T3饲养层细胞共培养进行扩增并连续传代，观察细胞生长情况及连续传代后的生物学特性，免疫组织化学进行干细胞鉴定。结果：与传统上皮细胞培养方式相比，含 Y27632的条件性培养基加3T3饲养层方式培养的上皮细胞生长迅速，细胞呈立方形或多角形，呈铺路石样排列。免疫组织化学染色表明这些干细胞表达 CK14，SOX2和LGR5。连续传代至第7代后，细胞形态、生长曲线和干细胞标志没有明显变化。结论：含有 Y27632的条件培养基可有效用于体外大量扩增非牙源性上皮细胞，并能保持干细胞生长特性，有望用于组织工程牙的种子细胞来源。%Objective:To characterize the role of conditioned culture media on expansion of non-odontogenic epithelial cells in vitro for potential seed cells of further tissue engineering tooth.Methods:The oral mucosa epithelial cells were harvested from 1 day postnatal mouse and cultured to confluency in conditioned media supplemented with Y27632,then passaged and plated onto 3T3 feeder cells in conditioned media with Y27632 for continuous passage.Histology and immunohistochemistry were performed for biological characteris-tics analysis of cells.Results:Compared with the traditional ways of epithelial cell culture,the oral mucosa epithelial cells plated onto 3T3 feeder cells in conditioned media supplemented with Y27632 grew rapidly,which showed a cuboidal,polygonal or pavement-like shape and expressed CK14,SOX2 and LGR5.After continuous passage,the cell morphology,growth curve and cell markers have no ob-vious changes.Conclusions:The conditioned culture media supplemented with Y27632 have potential to effectively expand non-odonto-genic epithelial cells in vitro,and maintain the characteristics of stem cells,which is expected for tissue engineering tooth as seed cells.

摘要： 目的 采用Balb/c小鼠成纤维细胞3T3建立新药体外3T3细胞中性红光毒性试验方法,并验证该方法的可靠性.方法 利用盐酸氯丙嗪作为阳性药物,建立体外3T3细胞中性红光毒性试验方法;然后基于上述试验方法检测6个已知光毒性物质的光毒性,对方法的灵敏度和特异性进行验证.结果 在本试验条件下,盐酸胺碘酮、诺氟沙星、蒽和原卟啉均表现出潜在光毒性;而六氯酚和L-组氨酸均无光毒性,试验结果与相关文献报道一致.结论 在本试验条件下,本研究成功建立并验证了体外3T3细胞中性红光毒性试验方法,可用于新药的光毒性评价.

摘要： 目的:研究五味子宁神口服液对3T3细胞紫外辐射损伤的保护作用.方法:建立3T3细胞紫外辐射模型,采用流式细胞术检测高、中、低剂量组(12.5,25.0,50.0 mg·ml-1)五味子宁神口服液作用前后细胞内活性氧浓度的变化,检测胞质匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH--Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量变化.结果:与中波紫外线辐射组(UVB组)比较,高、中、低剂量组五味子宁神口服液的活性氧含量和MDA含量显著降低(P＜0.01),SOD、CAT和GSH-Px活性显著升高(P＜0.01或0.05).结论:五味子宁神口服液能提高SOD、CAT、GSH-Px等酶活性,降低活性氧和MDA含量,对UVB辐射造成的细胞损伤具有保护作用.

摘要： 目的：构建单纯LIM蛋白3（LMO3）的逆转录表达载体,并观察其在 NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组：以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹（ Western blot）法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106 cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。

摘要： 目的针对肝纤维化发病关键基因热休克蛋白47(HSP47)基因构建HSP47-shRNA,初步验证其在NIH/3T3细胞系干预HSP47基因的表达,影响HSP47 mRNA及蛋白水平表达,并观察该细胞功能学变化。方法设计HSP47-shRNA模板,并将其分别设计于U6启动子的下游引物,将U6启动子及其下游HSP47-shRNA的模板双链DNA连接入载体,构建HSP47-pGCsi-U6-shRNA重组质粒(HSP47-1-pGCsi-U6-shRNA、HSP47-2-pGCsi-U6-shRNA和HSP47-3-pGCsi-U6-shRNA)。以非相关干扰质粒作为对照,通过脂质体介导转染HSP47-shRNA至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中,分别于12、24、48和72h在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率和荧光表达强度;同时于转染后0、24和48h收集细胞,采用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析HSP47 mRNA和蛋白表达情况;并观察干预后该细胞分泌胶原功能和小鼠转化生长因子(TGF-β1)表达的变化。结果成功构建HSP47-shRNA载体,通过脂质体介导转染入NIH/3T3细胞,各干扰质粒转染效率均约为60.0%,各干扰质粒转染效率间差异无统计学意义(P>0.05)。转染12 h,可见少量绿色荧光细胞,随转染时间的延长,细胞荧光表达量逐渐增加,各干扰质粒于转染72h荧光表达最强。shRNA干扰显著抑制HSP47蛋白的表达,以转染HSP47-1-shRNA 24h后对蛋白表达抑制效果最佳,对HSP47 mRNA的相对沉默效率为(25.83±1.79)%,与空白组及非相关对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。各组HSP47-shRNA干扰质粒对TGF-β1 mRNA的抑制效率以转染24 h效果最佳,相对表达分别为(63.23±2.18)%、(64.53±3.17)%和(75.19±4.20)%,均低于空白组和非相关对照组(P0.05)。各HSP47-shRNA干扰质粒组细胞上清中TGF-β1的抑制率以转染24h为最佳,分别为(51.79±3.12)%、(66.67±2.13)%和(69.61±3.65)%,与空白组相比,HSP47-1-shRNA组与HSP47-2-shRNA组对TGF-β1均有显著抑制作用,且以HSP47-1-shRNA组抑制效率更佳(P0.05)。结论构建了HSP47-shRNA干扰质粒,初步证实其对HSP47的表达干预有效,并引起NIH/3T3细胞功能学的变化。

摘要： 目的 通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用.方法 通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细胞周期分析和裸鼠成瘤实验,观察Piwil2基因表达对NIH3T3细胞的生物学特性的影响.结果 建立了稳定过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株.与对照组空白载体细胞系相比,过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞增殖和集落形成能力增强;细胞周期G0/G1期减少、S期明显升高;接种裸鼠后形成的肿瘤体积显著大于对照组.结论 Piwil2基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能.%Objective To establish a mouse fibroblastio cell line stably transfected with Piwil2 gene, and use such cell line to investigate tumor development and progression imposed by the ectopic expression of Piwil2 gene. Methods Eukaryotic expression vector pIRES2-EGFP-Piwil2 was transfected into mouse fibroblast cell line NIH3T3 by lipofectamine. Stable transfect-ants were selected by G418. The integration and expression of Piwil2 gene were analyzed by PCR. And then cell proliferation, cycle and apoptosis in experimental analysis, colony formation and tumor growth experiment were used to observe the impact of Piwil2 gene expression of NIH3T3 on biological characteristics. Results NIH3T3 cell line with stably expression of Piwil2 gene was successfully established and confirmed. Compared with control group, the NIH3T3 cell line with high expression of Piwil2 gene growed quickly and had high capability of colony formation. The S phase and M phase increased significantly. Tumor formation in nude mice was significantly greater than in the control group. Conclusion Expression of Piwil2 gene in NIH3T3 cells can induce malignant transformation of mouse fibroblastic cells both in vitro and in vivo.

摘要： 聚醚醚酮(polyetheretherketone,PEEK)与纳米羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)共混制备PEEK-HA生物复合材料.通过倒置荧光显微镜观察材料对细胞形态影响,不同HA含量的PEEK-HA复合材料中活细胞数目与空白对照无明显差异.采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)染色法研究细胞增殖的作用,发现不同HA含量的PEEK-HA复合材料的质量浓度为4mg/mL时,该生物复合材料对细胞增殖有一定促进作用；8～ 64 mg/mL时,对细胞增殖作用逐渐减小；64mg/mL时,对细胞增殖作用最小,表明随着材料质量浓度增加可抑制细胞增殖.测定PEEK-HA生物复合材料材料对3T3细胞黏附率,发现随着HA含量的增加,细胞黏附率增大,HA可以改善材料黏附性能.PEEK-HA生物复合材料细胞毒性级别均在Ⅰ级,说明对3T3细胞无毒性.%On the basis of preparing polyetheretherketone-hydroxyapatite (PEEK-HA) composite materials,this paper focuses on the effect of the composite materials on 3T3 cells proliferation at different periods and under different concentrations.Based on the polycondensation of polyether-ether-ketone,the biological material was prepared by adding 10％,20％ and 30％ hydroxyapatite blending into PEEK,respectively.The cell morphology 3T3 cell adhesion rate of the material was determined by cell counting with inverted fluorescence microscope.The MTT (4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) method was used to study cell proliferation in various conditions.Results show that,in a concentration of 4 mg/mL,the material played a significant role in cell proliferation,and,in a concentration of 64 mg/mL,the effect of PEEK composites on cell proliferation is slight.In addition,cell adhesion rate increases with an increase of the HA content in PEEK-HA materials.The content of HA can improve cell adhesion to the composite materials.Cytotoxicity of the materials is found at level Ⅰ,indicating that PEEK-HA composites are non-toxic to 3T3 cells.

摘要： 分离到一株产细菌纤维素(BC)的细菌,通过菌体形态、16SrRNA基因序列同源性分析鉴定,命名为Gluconacetobacter sp．SC-01．通过正交试验确定最佳培养基配方为4％甘露醇、1％玉米浆干粉、0．27％Na2HPO4、0．115％柠檬酸和0．025％MgSO4(pH4.0)。热失重分析表明,BC热失重速率最快时的温度为365°C。将海藻酸钠(ALG)、羧甲基纤维素(CMC)、聚谷氨酸(PGA)、壳聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)分别加入到发酵生产BC的培养基中进行BC的发酵法合成,结果发现除MCS外,ALG,CMC,PGA,或PVA的加入可以提高BC的产量和含水量。选取未改性的BC、及添加了0．5％ALG、1％PGA、1．5％CMC的改性BC作为培养3T3细胞的基质材料,实验结果表明添加了0．5％ALG的改性BC最适于3T3细胞生长,因而具有更好的生物相容性。

摘要： 分离到一株产细菌纤维素(BC)的细菌,通过菌体形态、16SrRNA基因序列同源性分析鉴定,命名为Gluconacetobacter sp．SC-01．通过正交试验确定最佳培养基配方为4％甘露醇、1％玉米浆干粉、0．27％Na2HPO4、0．115％柠檬酸和0．025％MgSO4(pH4.0)。热失重分析表明,BC热失重速率最快时的温度为365°C。将海藻酸钠(ALG)、羧甲基纤维素(CMC)、聚谷氨酸(PGA)、壳聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)分别加入到发酵生产BC的培养基中进行BC的发酵法合成,结果发现除MCS外,ALG,CMC,PGA,或PVA的加入可以提高BC的产量和含水量。选取未改性的BC、及添加了0．5％ALG、1％PGA、1．5％CMC的改性BC作为培养3T3细胞的基质材料,实验结果表明添加了0．5％ALG的改性BC最适于3T3细胞生长,因而具有更好的生物相容性。

摘要： 分离到一株产细菌纤维素(BC)的细菌,通过菌体形态、16SrRNA基因序列同源性分析鉴定,命名为Gluconacetobacter sp．SC-01．通过正交试验确定最佳培养基配方为4％甘露醇、1％玉米浆干粉、0．27％Na2HPO4、0．115％柠檬酸和0．025％MgSO4(pH4.0)。热失重分析表明,BC热失重速率最快时的温度为365°C。将海藻酸钠(ALG)、羧甲基纤维素(CMC)、聚谷氨酸(PGA)、壳聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)分别加入到发酵生产BC的培养基中进行BC的发酵法合成,结果发现除MCS外,ALG,CMC,PGA,或PVA的加入可以提高BC的产量和含水量。选取未改性的BC、及添加了0．5％ALG、1％PGA、1．5％CMC的改性BC作为培养3T3细胞的基质材料,实验结果表明添加了0．5％ALG的改性BC最适于3T3细胞生长,因而具有更好的生物相容性。

摘要： 分离到一株产细菌纤维素(BC)的细菌,通过菌体形态、16SrRNA基因序列同源性分析鉴定,命名为Gluconacetobacter sp．SC-01．通过正交试验确定最佳培养基配方为4％甘露醇、1％玉米浆干粉、0．27％Na2HPO4、0．115％柠檬酸和0．025％MgSO4(pH4.0)。热失重分析表明,BC热失重速率最快时的温度为365°C。将海藻酸钠(ALG)、羧甲基纤维素(CMC)、聚谷氨酸(PGA)、壳聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)分别加入到发酵生产BC的培养基中进行BC的发酵法合成,结果发现除MCS外,ALG,CMC,PGA,或PVA的加入可以提高BC的产量和含水量。选取未改性的BC、及添加了0．5％ALG、1％PGA、1．5％CMC的改性BC作为培养3T3细胞的基质材料,实验结果表明添加了0．5％ALG的改性BC最适于3T3细胞生长,因而具有更好的生物相容性。

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒；银纳米颗粒；氧化锌纳米颗粒；壳聚糖纳米颗粒，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将纺丝烘干，制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 本发明提供一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的制造方法以及包含由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体的体外(In vitro)三维皮肤真皮模型及使用该模型而筛选药物的方法。

摘要： 本发明涉及含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法。所述含细胞外基质的组合物包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。

摘要： 本公开涉及用于控制细胞行为的三维微环境结构、用于控制细胞行为的三维表面、以及用于制造阵列和三维微环境结构的方法。

摘要： 一种三维骨细胞主动接种方法、三维骨细胞主动接种支架及其制备方法。该制备方法包括：将聚有机硅氧烷与固化剂加入反应瓶中搅拌混匀，真空抽滤得混合物，加入导电填料、成孔剂后充分混合后超声处理，然后浇筑到模具中加热固化，得到复合导电薄层，在其表面浇筑一层混合物形成绝缘层，加热固化后激光切割，得到具有微结构的电极状薄膜，除去电极状薄膜中的成孔剂；将多个去除成孔剂后的电极状薄膜进行粘贴，形成三维骨细胞主动接种支架。该三维骨细胞主动接种方法包括：将该支架置于细胞悬浮液中进行细胞吸附，吸附牢固后转移至细胞培养液中培养一周。本发明具有较高的孔隙率、细胞接种效率高，制备方法简单，成本低廉，具有很大的市场潜力。

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，该方法包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于10~100ml的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂，加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒、银纳米颗粒、氧化锌纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒各0~2g，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将所述纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将所获得的纺丝进行烘干处理，即制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 本发明公开的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，包括向已灭菌的培养板中各孔移入肺泡上皮细胞混悬液，静置观察细胞贴附在孔底后，移液枪吸取上清培养液；向位于冰盒中的离心管内加入NaOH，之后加入I型胶原溶液混匀，再加入DMEM形成等渗等离子胶原溶液；向离心管内加入成纤维细胞混悬液混匀，取含成纤维细胞的胶原溶液分配于培养板孔内，室温静置观察胶原溶液凝固形成三维立体细胞胶原；向培养板孔内加入血管内皮细胞混悬液于胶原上面，形成血管内皮细胞层面，待血管内皮细胞贴于胶原后，用消毒药铲将胶原分离并浸漂在培养液中。本发明解决了现有三维立体培养方法不能模拟肺泡组织完整结构的问题。

摘要： 本发明提供一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的制造方法以及包含由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体的体外(In vitro)三维皮肤真皮模型及使用该模型而筛选药物的方法。

摘要： 本发明涉及含细胞外基质的组合物及其制造方法、以及三维组织体、三维组织体形成剂。所述含细胞外基质的组合物含有片段化的细胞外基质成分，片段化的细胞外基质成分的至少一部分发生了交联。

摘要： 本发明建立一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，本方法采用三联袋的方式从脐带血中分离出造血干细胞，三联袋分离的整个操作过程在封闭无菌的环境内完成，既可以减少操作过程的污染，同时对操作环境和人员的无菌要求低，便于操作；分离过程采用自动分浆夹去除血浆，速度快，操作简单，提高了操作效率。