小鼠胚胎

摘要： 背景:先天性心脏畸形常表现为动脉瓣膜发育异常,其中以主动脉瓣二叶式畸形最常见,但目前对于胚胎主、肺动脉瓣膜的具体发育过程有待阐明。目的:探讨小鼠胚胎心脏流出道的分隔与主、肺动脉瓣膜原基形成及其重塑过程。方法:2月龄SPF级健康ICR小鼠雌鼠16只、雄鼠10只,于每日晚18:00以雌雄2∶1的比例进行合笼,次日6:00发现阴栓者记为妊娠0.5 d。选取胚龄9.5-15 d的小鼠胚胎石蜡包埋连续切片,免疫组织化学染色观察胚龄9.5-15 d的小鼠胚胎心脏Isl1、Nkx2.5、肌球蛋白重链、Ap2α、Sox9、α-平滑肌肌动蛋白、Snail、Jag1、Notch2、Alk3和p-Smad1/5/8的蛋白表达;心脏的三维重建观察流出道心内膜垫和插入垫的变化以及瓣膜的形态。结果与结论:(1)胚龄9.5-10.5 d小鼠胚胎,流出道内皮细胞经过上皮-间充质转化形成心胶质内的间充质细胞,参与形成流出道心内膜垫;胚龄11-11.5 d,咽前Isl1阳性细胞延伸入流出道壁形成插入垫,此过程未发生上皮-间充质转化;Notch2信号参与流出道心内膜垫形成过程但未参与插入垫的形成;(2)胚龄12.5 d,流出道心内膜垫远端融合形成主动脉的左、右冠瓣和肺动脉的左、右半月瓣原基,插入垫形成主动脉的无冠瓣和肺动脉的前半月瓣原基,Notch2信号表达于所有瓣膜原基;胚龄13-15 d,动脉瓣膜原基完成重塑形成细长的瓣膜,Notch2信号在瓣膜的表达逐渐变弱;(3)研究结果提示,流出道插入垫内的间充质细胞来自第二生心区Isl1阳性细胞;Notch2信号可能未参与插入垫的形成,但可能参与流出道心内膜垫的形成以及主、肺动脉瓣膜原基的重塑。

摘要： 为了探讨c-型钠钛(CNP)对小鼠2细胞/4细胞胚胎转变及囊胚腔形成的影响,收集了小鼠原核期胚胎进行体外培养,随后在不同发育时期的培养体系中添加0,100,200μg/L CNP,分别为对照组、1组和2组。当胚胎发育至2-细胞阶段添加CNP,统计4细胞率和囊胚率;当胚胎发育至致密桑葚胚阶段添加CNP,统计囊胚成腔率、囊胚腔扩张率及囊胚孵化率,并测定扩张囊胚直径、囊胚腔面积占比及囊胚细胞数。结果表明:(1)2细胞阶段添加CNP后,与对照组相比,2组的4细胞发育率和囊胚率显著降低(P0.05),但囊胚总细胞数显著降低(P<0.05);(3)致密桑葚胚阶段添加CNP,与对照组相比,2组的囊胚成腔率、囊胚腔扩张率、孵化率、囊胚腔直径、囊胚腔面积占及囊胚总细胞数均显著降低(P<0.05)。说明外源添加CNP抑制了小鼠2细胞/4细胞胚胎的转变、囊胚腔的形成与扩张,并降低了囊胚细胞数。

摘要： 胚胎在母体的子宫内发育成熟,新的生命才能诞生,这是大家熟知的一项常识。但如果没有子宫,胚胎可以生长发育吗?也不是不行。魏茨曼科学研究所的Jacob H.Hanna教授和他的研究团队做了一个“机器子宫”,成功地让小鼠胚胎在里面发育了6天,经历了原肠胚前期到器官发生晚期的关键阶段。这项研究成果于2021年3月发表在顶级期刊《自然》上。

摘要： [目的]研究标准气充气时间对密闭培养的小鼠4细胞胚胎体外发育的影响,为太空环境下哺乳动物的早期胚胎发育研究奠定基础.[方法]用气体组成为体积分数5％O2、5％CO2、90％N2的高纯标准气对胚胎培养液进行充气处理,充气时间设为30,60,90,120,150,180和240 min,用充气培养液对小鼠4细胞胚胎进行密闭培养,以常规体外微滴培养的胚胎为对照,分别在培养12,36,60,84 h时检测各组体外培养胚胎过氧化物的积累情况和缺氧诱导因子(HIF-1α)表达的变化,并于培养84 h统计囊胚发育率、孵化率和囊胚总细胞数.[结果]当充气时间≥180 min时,胚胎发育早期存在明显的过氧化物积累现象;当充气时间≤120 min时,胚胎发育过程中可以检测到HIF-1α,表明出现缺氧现象.密闭培养条件下,培养液充气120～180 min时的小鼠胚胎囊胚发育率、孵化率和囊胚总细胞数较高,分别为93.38％～95.68％,61.03％～65.27％和102.33～111.83,其中囊胚发育率和囊胚总细胞数与对照组差异不显著(P＞0.05),而囊胚孵化率显著高于对照组(P＜0.05).[结论]小鼠4细胞胚胎密闭培养体系适合的培养液充气方案为:用气体组成比例为体积分数5％O2、5％CO2、90％N2的高纯标准气充气120～150 min,此方案下进行密闭培养的小鼠胚胎可获得较高的发育率,并可有效排除缺氧对早期胚胎体外发育的影响,同时保护胚胎免受过氧损伤.

摘要： 目的 探讨小鼠胚胎心包内动脉心外膜的起源、形成及其所含细胞在心包内主、肺动脉管壁发育过程中可能的作用.方法 取胚龄E9.5—E16的小鼠胚胎石蜡包埋连续切片,进行免疫组织化学染色.提取及培养E13小鼠胚胎心包内主、肺动脉组织原代心外膜祖细胞,进行免疫荧光染色.结果 E9.5—E10.5小鼠胚胎,心外膜逐渐形成并分布于心房、房室管和心室壁外表面,但流出道壁心外膜尚未形成;E11—E11.5小鼠胚胎,流出道非心肌部逐渐分隔为心包内升主动脉和肺动脉干,动脉心外膜开始出现在心包腔背侧壁以及与之相连的流出道壁远端;E12.5—E16小鼠胚胎,心包内主、肺动脉完全分隔,第二生心区前体细胞与动脉心外膜向平滑肌细胞分化,动脉瓣膜内也可见动脉心外膜来源的心外膜细胞.结论 小鼠胚胎流出道非心肌部心外膜来自于动脉端心包腔背侧壁脏壁中胚层,动脉心外膜来源的间充质细胞可以进入动脉中膜,参与动脉壁的发育,同时参与动脉瓣膜的发育.

摘要： 探讨间充质前体细胞参与心静脉端发育与传导系早期形态发生的关系。胚龄10~14d小鼠胚胎心连续石蜡切片,进行抗转录因子islet1(Isl1)、Iroquois homeobox gene1(Irx1)、Tbx3、Nkx2.5和抗心肌肌球蛋白重链(MHC)的免疫组织化学及免疫荧光染色,三维软件Amira5.2处理染色结果。胚龄10~12d,后第二生心区的Isl1阳性表达沿右侧心背系膜延续至右心房背侧壁的窦房结原基。

摘要： 为了探讨影响小鼠胚胎玻璃化冷冻效果的因素,试验对玻璃化冷冻液成分加以改进,在EFS30和EFS40玻璃化冷冻液中添加抗冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ),对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,并采用两步、三步解冻法对冷冻胚胎进行解冻,统计胚胎解冻后的存活率及孵化率。结果表明:在冷冻液EFS30中添加500 ng/mL AFPⅢ、用三步法解冻的效果最好,存活率和孵化率分别为92.8%和83.3%。说明AFPⅢ是一种有效的小鼠胚胎玻璃化冷冻保护剂。

摘要： 背景:C型钠肽作为生理抑制剂可抑制小鼠卵母细胞的减数分裂,但其是否对所获得胚胎的发育能力具有促进作用尚不完全明确.目的:研究C型钠肽预处理对小鼠胚胎质量的影响.方法:利用C型钠肽预处理小鼠卵母细胞8 h后,再进行体外成熟24 h,将成熟后的卵母细胞体外受精,获得体外胚胎(实验组),以小鼠卵母细胞常规体外成熟培养24 h后所获得的胚胎为对照组.实验方案中有关动物伦理问题已经得到乌兰察布医学高等专科学校动物实验伦理委员会的批准,伦理批号:WYZLL[2016]1601.结果与结论:实验组平均囊胚细胞数明显高于对照组平均囊胚细胞数(P<0.05);2组的线粒体DNA拷贝数均随胚胎发育逐渐增加,且实验组增长速度较对照组快(P<0.05);实验组的活性氧水平显著低于对照组(P<0.05),实验组各胚胎时期胚胎细胞的谷胱甘肽水平显著高于对照组(P<0.05).提示C型钠肽预处理对小鼠胚胎的发育能力有了明显的提高.

摘要： This study had investigated the localization and expression of fibroblast growth factor21 (FGF21) with its receptors FGFR1 and FGFR2in the formation phase of embryonic mice hair follicles.E13-E18 embryonic mice back skin were used to determine the mRNA and protein relative expression levels of FGF21, FGFR1 and FGFR2by immunohistochemistry, Real-time PCR and Western blotting analysis.The results showed that: (1) FGF21expressed in epidermis, basal layer and connective tissue at E13;Expressed in epidermis and placode at E14;Slightly expressed in hair bud at E15;Expressed in hair peg at E16 and E17;Mainly expressed in immature hair follicle at E18.FGFR1 and FGFR2expressed in epidermis, basal layer, placode, hair bud, hair peg, immature hair follicle and connective tissue at E13-E18. (2) The results of Real-time PCR and Western blotting showed that the relative expression levels of FGF21 mRNA and protein were higher at E14 than that of any other stages;The relative expression levels of FGFR1 mRNA and protein were higher at E16-E17;And the relative expression of FGFR2 mRNA and protein showed as-cending trend from E13 to E18and was highest at E18.In summary, during the embryonic hair follicle formation and development, FGF21 might play a role in inducing hair follicle activation;FGFR1might promote hair peg formation;FGFR2might be necessary to induce hair follicle formation and hair follicle maturation.%本试验旨在通过研究成纤维细胞生长因子21 (fibroblast growth factor 21, FGF21) 及其受体FGFR1、FGFR2在胚胎小鼠毛囊形成阶段中的定位与表达, 从而探究其在小鼠毛囊形成中的作用.试验采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR及Western blotting方法研究FGF21、FGFR1、FGFR2蛋白和mRNA在胚胎期13～18d (E13～E18) 小鼠皮肤中的表达.结果显示: (1) FGF21蛋白在E13主要表达于表层细胞、基底层细胞及结缔组织中, E14表达于表层细胞和基板, E15在毛芽中有微量表达, E16、E17表达于毛钉中, E18主要表达于未成熟毛囊细胞;FGFR1和FGFR2蛋白在E13～E18于表层细胞、基底层、基板、毛芽、毛钉、未成熟毛囊和结缔组织中均有表达. (2) 实时荧光定量PCR及Western blotting结果显示:FGF21mRNA和蛋白在E14相对表达量最高;FGFR1mRNA及蛋白在E16～E17相对表达量较高;FGFR2mRNA及蛋白的相对表达量在E13至E18均呈上升趋势, 在E18相对表达量最高.结果提示:在小鼠胚胎期毛囊形成和发育过程中, FGF21可能在诱导毛囊启动过程中发挥一定的作用;FGFR1可能促进毛钉形成;FGFR2可能在毛囊形成和成熟中发挥重要作用.

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本发明公开了一种提高DNA甲基化的小鼠胚胎干细胞培养液及小鼠胚胎干细胞诱导培养方法，第一步将小鼠2i/L‑ESCs用N2B27中添加白血病抑制因子（LIF培养液）进行诱导获得只依赖LIF的小鼠胚胎干细胞（L‑ESCs），并鉴定了其多能性。第二步是将小鼠2i/LIF‑ESCs培养体系换成15%胎牛血清中添加白血病抑制因子的培养液(S/L培养液)，培养5天后，再替换成LIF培养液进行培养，高效率得到L‑ESCs。更换S/L培养液的主要目的是为了提高小鼠ESCs的DNA甲基化水平，这样可有效提高LIF依赖性ESCs的重编程效率。本发明首先诱导了只依赖LIF的小鼠ESCs，并鉴定了其特性；其次利用特定的诱导方法提高了LIF依赖性小鼠ESCs重编程效率，对哺乳动物多能干细胞体外培养提供新思路。

摘要： 本发明公开了一种提高2C‑like细胞的小鼠胚胎干细胞诱导培养液及小鼠胚胎干细胞诱导培养方法，第一步是从小鼠ESCs培养体系中去除胎牛血清，使小鼠ESCs仍保持原有的多能性特征。第二步是利用视黄酸（RA）在不含有胎牛血清的培养液中提高小鼠ESCs中2C‑like细胞的比例，结果从对照组的0.2%提高到3.3%。本发明利用特定的诱导方法提高了小鼠ESCs中2C‑like细胞比例，并通过实验手段验证了小鼠ESCs在不含有胎牛血清的培养液中2C‑like基因表达水平和蛋白水平，对哺乳动物全能干细胞研究提供新思路。

摘要： 本发明是一种维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的低表达Lin28的小鼠胚胎干细胞的制备方法。该方法是将序列表中序列1的Lin28干扰序列构建在RNAi‑ReadypSIREN‑RetroQ干扰载体中，获得含有RNA‑Lin28干扰重组质粒；并通过脂质体（Lipofactamine2000）转染的方法将RNA‑Lin28干扰重组质粒转染到小鼠胚胎干细胞D3中，并通过重组载体上含有的抗药物筛选基因嘌呤霉素(puromycin)通过加入药物进行筛选并建立转基因细胞系，以所述转基因细胞进行小鼠胚胎干细胞Naive状态的各种指标监控，发现Lin28表达降低对小鼠胚胎干细胞Naive状态维持起到促进作用。本发明的方法能在转基因小鼠胚胎干细胞中内稳定干扰Lin28表达，显著提高维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的能力。

摘要： 本发明涉及小鼠胚胎肝基质细胞KM3作为人胚胎干细胞饲养层细胞的用途。具体是KM3细胞经过10μg/ml的丝裂霉素C处理2h后，在液氮中冻存60d，复苏后细胞可作为人胚胎干细胞传代培养的饲养层细胞，支持人胚胎干细胞稳定传代。

摘要： 本发明公开了一种小鼠胚胎体外延时培养用培养基，含有基础培养基和胎牛血清、人脐血清、丙酮酸钠、谷氨酰胺、青霉素‑链霉素、N2添加剂和B27添加剂，能在提高培养成功率的基础上将体外小鼠胚胎连续培养的阶段推进到E8.0。为植入前胚胎、植入期胚胎的发育研究提供基础，培养成功率的提高和体外培养时间的延长都能扩大小鼠胚胎相关实验内容和实验期的选择范围，也可以为其它哺乳动物胚胎体外培养提供依据。

摘要： 本发明公开了一种基于3D培养条件下温石棉诱导的小鼠胚胎成纤维细胞恶性转化株及其应用，属于生物学和肿瘤学技术领域。所述小鼠胚胎成纤维细胞恶性转化株分类命名为：小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3/3As‑T，保藏号为：CCTCC NO：C2021138。本发明提供的小鼠胚胎成纤维细胞恶性转化株是在3D培养条件下由小鼠胚胎成纤维细胞经温石棉多阶段多次染毒处理后，发生恶性转化获得。3DCC模拟了体内肿瘤细胞生长的微环境，构建的小鼠胚胎成纤维细胞恶性转化株具有与体内肿瘤细胞相似的形态学和细胞生物学特性，在作为致癌物致癌机制研究的细胞模型等多个方面具有良好的应用前景。

摘要： 一种大、小鼠胚胎移植用的胚胎移植器，本实用新型包括胚胎收集管、软接头和与注射器连接的软管，注射器与胚胎收集管用软接头及软管连接，以缓冲前两者力量；胚胎收集管中段炙烤呈110~120°且具有内径Φ300～400μm的钝化的管尖端口，以减少对子宫及输卵管和胚胎的损伤，避免胚胎丢失。本实用新型无菌控制好，质量稳定，便于从倒置显微镜体或视镜下观察收集胚胎及移植，且制备简单，成本低。