摘要:目的:观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和VCAM-1的表达及与人单核细胞粘附作用的影响. 方法:采用改良的Jaffe方法分离、鉴定和培养HUVEC.随机分为:正常对照组;ox-LDL组:以含100mg·L-1ox-LDL的DMEM培养液处理HUVEC,置培养箱中继续培养12、24h;药物组:活血注射液(终浓度分别为10、20、40ml/L)于实验时加入培养液中,其余同ox-LDL组.利用计数法观察HUVEC与单核细胞的粘附率;用流式细胞仪测定HUVEC的ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC的ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达. 结果:人单核细胞与HVUEC的粘附率在ox-LDL作用12、24h后明显升高,其粘附率(﹪)分别为36.84±2.52,58.01±4.43,明显高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),分别为4.14±0.33,4.37±0.39,而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的粘附率.ox-LDL作用HUVEC后12、24h时,HUVEC的ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平均明显升高,ICAM-1的mRNA表达水平分别为1.304±0.058,1.397±0.066,明显高于正常对照组(P<0.01),分别为1.018±0.035,1.038±0.047;VCAM-1的mRNA表达水平分别为1.243±0.064,1.252±0.072,明显高于正常对照组(P<0.01),分别为0.822±0.035,0.828±0.047;而活血注射液能明显降低ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平,与ox-LDL组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01).HUVEC的ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达在ox-LDL作用12、24h时均明显升高,ICAM-1的平均荧光强度(﹪)分别为51.64±4.38,77.59±7.03,明显高于正常对照组(P<0.01),其平均荧光强度(﹪)分别为4.21±0.47,4.38±0.36;VCAM-1的平均荧光强度(﹪)分别为26.14±3.37,38.19±5.13,明显高于正常对照组(P<0.05,P<0.01). 结论:HUVEC表达暴露于ox-LDL中12、24h后,其ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达及其mRNA表达显著增加,与人单核细胞的粘附率显著增加,提示ox-LDL对HUVEC有较强的细胞毒性,有利于单核细胞和脂质向内皮下侵入,表明ox-LDL在动脉粥样硬化形成早期的内皮细胞损伤中起着重要作用,而活血注射液能明显降低内皮细胞与单核细胞粘附率,降低或抑制VEC中ICAM-1和VCAM-1的mRNA及蛋白的表达,这种作用随着剂量的增加而增强,这种抑制作用的机制有待于进一步研究.动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病的病理基础,高脂血症和高血糖等很多因素可促使AS的发生,然而AS的细胞和分子机制至今尚未完全阐明.近年来的研究表明,低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)易被氧化为氧化型LDL(ox-LDL)和VLDL(ox-LDL),经氧化修饰增加了这两种脂蛋白促进动脉粥样硬化形成的作用.血管内皮细胞活化是AS发病的始动环节,白细胞特别是单核细胞(MC)与活化血管内皮细胞粘附并迁移集聚于内膜下,摄取ox-LDL形成泡沫细胞是AS发病的早期病理表现.早期损伤机理的阐明有助于推迟或阻止损伤的发展,本研究采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察活血注射液对ox-LDL诱导的内皮细胞与单核细胞粘附率和内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的mRNA和蛋白表达的影响,探讨中药复方制剂防治AS的细胞黏附过程的作用机制.