角膜缘干细胞

摘要： 背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题.在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段.目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响.方法:根据细胞形态、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原表达鉴定骨髓间充质干细胞及过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞.按照培养细胞和培养基不同进行分组:对照组(骨髓间充质干细胞+完全培养基)、实验组A(骨髓间充质干细胞+条件培养基)、实验组B(骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)、实验组C(过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子).诱导5,10 d时采用免疫荧光、流式细胞术检测p63、k14和k12的表达,流式细胞术检测细胞增殖指标Ki-67的表达和细胞凋亡率,Western blot法和RT-PCR法检测配对盒基因6的蛋白和mRNA表达.结果 与结论:①诱导培养前,两组细胞均具有骨髓间充质干细胞的特性.②诱导培养后,均出现球型或卵圆形的细胞,呈悬浮生长.4组细胞的角膜缘干细胞样细胞特异性分子p63、k14表达阳性,实验组荧光表达量高于对照组(P<0.05),而角膜上皮分子k12表达阴性.随着培养条件的优化,实验组C的细胞增殖更明显,凋亡细胞更少.诱导5 d时,实验各组配对盒基因6的蛋白及mRNA表达量呈递增变化.③结果 表明,条件培养基联合细胞因子诱导可加快骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化.过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞定向分化的速度和比例更具有优越性,且其能促进细胞增殖、抑制细胞凋亡.

摘要： 目的:探讨改良带角膜缘干细胞的游离结膜瓣移植术治疗翼状胬肉的临床疗效及对泪膜功能的影响。方法:病例对照研究。将我院2017-03/2021-03收治的60例60眼翼状胬肉患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,各30例30眼,对照组给予翼状胬肉切除联合羊膜移植术治疗,观察组给予翼状胬肉切除联合改良带角膜缘干细胞的游离结膜瓣移植术治疗,治疗周期均为21d。比较两组患者临床疗效、手术时间、角膜创面修复时间,术前和术后1、3mo的干眼评分、泪膜破裂时间值和基础泪液分泌试验值以及不良反应发生情况。结果:观察组临床治疗总有效率高于对照组(χ^(2)=5.963,P=0.015),观察组手术时间长于对照组(t=-2.643,P<0.05),角膜创面修复时间短于对照组(t=2.182,P<0.05)。两组患者在术后1、3mo,干眼评分与术前比较均下降(均P<0.05),且观察组与对照组比较有差异(t=2.082、3.956,均P<0.05)。术后1、3mo泪膜破裂时间与术前比较均升高(均P<0.05),且观察组与对照组比较有差异(t=4.245、2.070,均P<0.05);术后1、3mo基础泪液分泌试验值与术前比较均升高(均P<0.05),且观察组与对照组比较有差异(t=2.076、2.223,均P<0.05)。两组患者的并发症发生率比较差异无统计学意义(P=0.572)。结论:改良带角膜缘干细胞的游离结膜瓣移植术可有效改善翼状胬肉患者临床症状,改善泪膜功能,利于术后角膜创面修复,不良反应发生率较低。

摘要： 目的:探究翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术对改善翼状胬肉眼部美观度的效果。方法:选择2018年3月-2021年3月期间笔者医院收治的翼状胬肉患者60例作为研究对象,采用随机数字表法分为两组,对照组(n=30,给予翼状胬肉切除),观察组(n=30,给予翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术),对比两组患者手术治疗效果、拆线时间、角膜上皮愈合时间、泪膜破裂时间(BUT)、角膜散光度、并发症及不适感情况。结果:观察组治愈率较对照组高,拆线时间、角膜上皮愈合时间较对照组短,复发率较对照组低(P0.05)。结论:与单纯切除术对比,翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术治疗在改善散光度及泪膜稳定性方面的效果接近,能够降低复发率,减少术后不适感,减轻排异反应,缩短愈合时间。

摘要： 目的探讨角膜缘干细胞与带蒂结膜瓣移植术治疗翼状胬肉的临床效果。方法选择2018年1月-2019年1月我院收治的翼状胬肉患者70例,采用随机数字表法分为两组,各35例。两组均行胬肉切除术,对照组实施带蒂结膜瓣移植术,观察组实施角膜缘干细胞移植术,比较两组角膜修复时间、复发率及并发症。结果观察组角膜修复时间(<14d、14-21d、22-30d患者占比分别为40.00%、57.14%、2.86%)短于对照组(<14d、14-21d、22-30d患者占比分别为0.00%、42.86%、57.14%),差异有统计学意义(Z=5.606,P=0.000);观察组术后4个月内复发率(2.86%)低于对照组(22.86%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.590,P=0.012);观察组并发症发生率(5.71%)低于对照组(25.71%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.285,P=0.022)。结论角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉效果较好,可促进患者角膜修复,减少术后并发症,降低复发率。

摘要： 目的:研究翼状胬肉患者带角膜缘干细胞的自体结膜移植术后应用软性角膜接触镜对其患眼疼痛程度及复发率的影响。方法:以2019年9月-2020年9月武汉市华润武钢总医院收治的83例(100眼)翼状胬肉患者为研究对象,依照区组随机化分组法将其分为对照组(41例49眼)和观察组(42例51眼)。对照组采用传统手术方式进行带角膜缘干细胞的自体结膜移植术,观察组在对照组基础上术后应用软性角膜接触镜。比较两组角膜上皮缺损面积、角膜创面愈合时间;观察两组术后1 d、3 d、1周患眼疼痛程度[视觉模拟评分法(VAS)];对比两组术前及术后1周、1个月、3个月泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SIt)及裸眼视力(UCVA)、角膜散光度(CAD);统计两组术后1个月内并发症发生情况及术后6个月内复发率。结果:两组角膜上皮缺损面积比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组角膜创面愈合时间明显短于对照组(P0.05)。观察组术后1个月并发症发生率明显低于对照组(P0.05)。结论:翼状胬肉患者带角膜缘干细胞的自体结膜移植术后应用软性角膜接触镜,能有效加快患者术后恢复,缓解患眼疼痛程度,降低术后并发症发生风险,且并不影响复发率,具有较高临床应用价值。

摘要： 目的比较静止期翼状胬肉选择单纯切除术与自体角膜缘干细胞移植术两种手术方式治疗效果。方法A组:静止期翼状胬肉患者28例28眼行翼状胬肉单纯切除手术,B组:静止期翼状胬肉患者32例32眼行翼状胬肉切除伴自体角膜缘干细胞移植术。两组分别对手术整体时间、术后角膜创面上皮愈合时间、术后复发率进行比较。结果A组手术时间(21.54±3.636)min明显短于B组(33.06±4.697)min,差异有统计学意义(t=10.515,P0.05),术后1个月,3个月翼状胬肉复发率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.365,2.435,P均>0.05)。结论对静止期翼状胬肉手术方式选择上,单纯切除术手术时间短,术后复发率与自体角膜缘干细胞移植术无明显差异。在临床上,对于高龄的静止期翼状胬肉患者,不能耐受长时间手术的,选择单纯切除手术方式也是不错的选择。

摘要： 外伤、感染、先天性疾病等均可能破坏角膜的组织结构和细胞稳态,同时造成角膜干细胞缺损,进而导致组织无法正常愈合,引起角膜盲,是世界范围内致盲的重要原因之一。目前已有多种干细胞相关的技术方法应用于重建功能性角膜组织,取得了瞩目的治疗效果。本综述以角膜缘干细胞缺乏症为主,旨在介绍多种来源的干细胞在角膜重建中的研究现状和最新进展,同时对不同干细胞的特异性标志物的研究进展进行阐述。

摘要： 【目的】研究北京油鸡角膜缘干细胞(LSCs)分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性。【方法】取10胚龄健康北京油鸡鸡胚的角膜缘,采用分散酶Ⅱ(dispaseⅡ)联合胰蛋白酶二步法分离细胞,进行体外培养,绘制生长曲线,通过免疫荧光和RT-PCR技术鉴定LSCs特异性标志物细胞角蛋白3(CK3)、CK12、细胞周期调控蛋白p63、ATP结合盒转运蛋白(ABCG2)和细胞角蛋白19(CK19)的表达;通过成骨和成软骨诱导检测其多向分化潜能。【结果】获得的北京油鸡细胞折光性强、贴壁后呈多角形,生长曲线呈典型的S型,群体倍增时间(PDT)随着代次的升高逐渐下降;免疫荧光检测结果表明,分离的细胞中ABCG2、p63和CK19均呈阳性表达,CK3和CK12不表达;RT-PCR检测结果表明,分离的细胞表达p63、CK19、ABCG2,不表达CD45,说明分离的细胞为LSCs。LCSs成骨诱导分化后,可见被茜素红染色的矿化钙结节,RT-PCR检测结果表明其表达成骨关键基因骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ);成软骨诱导分化后,可见被阿利新蓝染色的软骨组织,RT-PCR检测结果表明其表达成软骨细胞关键基因转录因子性别决定区Y框9(SOX-9)和Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ)。【结论】本研究成功从10胚龄北京油鸡胚胎角膜缘中分离LSCs,且其具有良好的增殖活力及成骨和成软骨能力,结果可为禽类LSCs的资源保存研究提供参考。

摘要： 目的:分析自体角膜缘上皮联合球结膜移植在翼状胬肉中的治疗效果。方法:选取2016年1月至2021年1月本院收治的60例患者作为研究对象,根据手术方法将其分为两组。其中,30例行单纯翼状胬肉切除术者纳入对照组,30例行翼状胬肉切除术联合带角膜缘的自体结膜移植术的患者纳入观察组。对比两组患者治疗效果、复发率、术后视觉质量、泪膜功能以及并发症发生情况。结果:观察组复发率低于对照组(P0.05);术后,观察组视力、角膜水平曲度、角膜垂直曲度较对照组明显提高,角膜散光度低于对照组,差异显著(P0.05);治疗后,观察组BUT、SIT水平显著高于对照组(P<0.05);观察组并发症发生率低于对照组(P<0.05)。结论:自体角膜缘上皮联合球结膜移植治疗翼状胬肉疗效确切,可有效重建角膜缘功能,增加角膜屈光度,降低散光度,同时对改善患者泪膜功能有一定优势,有利于降低并发症发生率。

摘要： 目的 观察翼状胬肉患者逆行撕除术联合自体角膜缘干细胞移植术术后配戴绷带型角膜接触镜的疗效.方法 将原发性单侧翼状胬肉患者78例(78只眼)随机分成试验组和对照组各39例(39只眼),两组均由同一组医生施行翼状胬肉逆行撕除术联合自体角膜缘干细胞移植术.试验组在手术结束即刻于角膜表面配戴绷带型角膜接触镜1片,对照组采取弹力绷带加压包扎.术后1天、2天、3天、1周进行随访,观察角膜上皮修复情况、角结膜刺激症状.结果 试验组在角膜上皮修复、角结膜刺激症状评分方面的具体数据均优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 翼状胬肉逆行撕除术联合自体角膜缘干细胞移植术后佩戴绷带型角膜接触镜能有效促进角膜上皮修复、减轻术后角膜刺激症状.

摘要： 目的：探讨P63蛋白作为角膜缘干细胞阳性标记物的可行性和意义,为研究和鉴定角膜缘干细胞存活、增殖和分化情况提供进一步的科学依据。方法：取正常新西兰兔角膜全层标本5份(包括角膜缘和结膜),同时取角膜缘干细胞移植后3个月上皮生长良好的角膜全层标本和角膜失代偿标本各5份.10％的中性福尔马林固定24小时,石蜡包埋保存,免疫组化SP三步法检测P63蛋白在不同组标本供体干细胞的表达情况.结果：在兔标本上,P63在角膜缘干细胞核内呈高表达,而短暂扩充细胞虽然也具备一定的增殖和分化能力,但是p63的表达数量明显减少.角膜中央和结膜呈阴性表达.结论：P63可以特异性地标记角膜缘干细胞,对干细胞的研究和鉴定以及干细胞在眼表重建的应用中具有一定的价值.

摘要： 目的:评价深低温冷冻保存兔眼角膜缘干细胞活性.方法:12只(12眼)新西兰白兔,制备带2 mm周边角膜和2 mm球结膜的环形线层角膜缘植片及角膜干细胞缺乏眼表疾病模型.角膜缘植片通过程序降温仪程序降温后-196°C深低温保存,30 d和60 d后行角膜缘自体移植.组化及免疫组化证实深低温保存的角膜缘干细胞活性.结果:角膜干细胞缺乏导致角膜上皮愈合延迟,上皮结膜化,PAS染色阳性,AE5染色弱阳性;基质水肿,角膜血管化.深低温保存角膜缘干细胞自体移植能促进角膜上皮愈合,为角膜表型,PAS色阴性,AE5染色阳性.基质水肿逐渐吸收,新生血管消退、变细.结论:深低温保存法能保存角膜缘干细胞活性;能随时按需为临床提供活性角膜缘材料;为深低温保存角膜缘干细胞移植治疗临床眼表疾病提供了实验依据.

摘要： 本发明涉及生物工程医疗材料领域，公开了一种脱细胞角膜缘保护液及脱细胞角膜缘的制备方法。本发明的脱细胞角膜缘保护液的成分为含有5～12g/L透明质酸、5～20g/L硫酸软骨素、3～10g/L低分子右旋糖酐和2.5～5mg/L妥布霉素的PBS缓冲液。将含前弹力层的新鲜猪角巩膜缘基质密封于所述脱细胞角膜缘保护液中，采用高静压处理破碎细胞；将细胞破碎后的角膜缘置于添加了去垢剂和核酸酶的所述脱细胞角膜缘保护液中进行震荡脱细胞处理；将脱细胞后的角膜缘置于所述脱细胞角膜缘保护液中漂洗完成制备。采用本发明的方法所获取的脱细胞角膜缘，脱细胞彻底，最小的减少了对角膜缘结构的破坏，生物相容性好，有利于自体细胞增殖爬行。

摘要： 本发明涉及生物工程医疗材料领域，公开了一种脱细胞角膜缘保护液及脱细胞角膜缘的制备方法。本发明的脱细胞角膜缘保护液的成分为含有5～12g/L透明质酸、5～20g/L硫酸软骨素、3～10g/L低分子右旋糖酐和2.5～5mg/L妥布霉素的PBS缓冲液。将含前弹力层的新鲜猪角巩膜缘基质密封于所述脱细胞角膜缘保护液中，采用高静压处理破碎细胞；将细胞破碎后的角膜缘置于添加了去垢剂和核酸酶的所述脱细胞角膜缘保护液中进行震荡脱细胞处理；将脱细胞后的角膜缘置于所述脱细胞角膜缘保护液中漂洗完成制备。采用本发明的方法所获取的脱细胞角膜缘，脱细胞彻底，最小的减少了对角膜缘结构的破坏，生物相容性好，有利于自体细胞增殖爬行。

摘要： 本发明公开了一种诱导人胚胎干细胞定向分化为角膜缘干细胞的培养方法，步骤如下：首先，采用DMEM/F12条件培养基培养人原代角膜缘干细胞，制备角膜缘干细胞条件培养基；然后，利用该角膜缘干细胞条件培养基联合IV型胶原体外培养诱导人胚胎干细胞定向分化为角膜缘干细胞。利用本发明的方法得到的角膜缘干细胞，经体外光学显微镜观察、电子显微镜观察、实时定量聚合酶链式反应、免疫荧光、流式细胞分析及克隆形成率测定等证实诱导细胞具有与正常角膜缘干细胞相似的形态和表型，并表现出良好的体外分化增殖能力，可体外传代4代以上，可以作为种子细胞用于制备角膜移植物。

摘要： 本发明的目的是提供一种睫状神经营养因子在促进角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复中的应用，具体涉及睫状神经营养因子及其衍生物在制备药物及药物组合物中的用途，可用于眼表角膜和结膜上皮干细胞的培养、糖尿病角膜病变的治疗、神经性角膜炎的治疗、角膜缘干细胞缺乏症的治疗。

摘要： 本发明公开了一种冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法，将自体角膜缘干细胞体外长期保存，可以满足在不同的实验条件下，对角膜缘干细胞的运输、保存和增殖的要求。并用保存的角膜缘干细胞采用无饲养层的方法构建角膜上皮植片，实现临床上角膜缘干细胞缺损后的角膜上皮自体重建；本发明能够成功构建的人工角膜上皮植片，自体移植到角膜缘干细胞缺失的角膜表面，复明效果明显。在临床上具有广泛的应用潜力。

摘要： 本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法。本发明提供的培养基中，以胎牛血清促进角膜缘干细胞的生长，以AcSDKP抑制成纤维细胞的生长。因此，采用本发明提供的培养基能够具有选择性的分离角膜缘干细胞，且分离培养所得的角膜缘干细胞的纯度和数量皆较高，且由于成纤维细胞的生长受到抑制，角膜缘干细胞受到成纤维细胞分泌物的影响较少，干性保持良好。实验表明，采用本发明提供的培养基分离角膜缘干细胞，细胞中抗体CX43的阳性率为0.1％，AE5的阳性率为0.3％，BrdU的阳性率为50.3％，PCNA的阳性率为45.9％。该效果显著优于现有技术。

摘要： 本发明公开了一种诱导人胚胎干细胞定向分化为角膜缘干细胞的培养方法，步骤如下：首先，采用DMEM/F12条件培养基培养人原代角膜缘干细胞，制备角膜缘干细胞条件培养基；然后，利用该角膜缘干细胞条件培养基联合IV型胶原体外培养诱导人胚胎干细胞定向分化为角膜缘干细胞。利用本发明的方法得到的角膜缘干细胞，经体外光学显微镜观察、电子显微镜观察、实时定量聚合酶链式反应、免疫荧光、流式细胞分析及克隆形成率测定等证实诱导细胞具有与正常角膜缘干细胞相似的形态和表型，并表现出良好的体外分化增殖能力，可体外传代4代以上，可以作为种子细胞用于制备角膜移植物。

摘要： 本发明的目的是提供一种睫状神经营养因子在促进角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复中的应用，具体涉及睫状神经营养因子及其衍生物在制备药物及药物组合物中的用途，可用于眼表角膜和结膜上皮干细胞的培养、糖尿病角膜病变的治疗、神经性角膜炎的治疗、角膜缘干细胞缺乏症的治疗。

摘要： 本发明公开了一种冻存自体角膜缘干细胞的无饲养层构建角膜上皮方法，将自体角膜缘干细胞体外长期保存，可以满足在不同的实验条件下，对角膜缘干细胞的运输、保存和增殖的要求。并用保存的角膜缘干细胞采用无饲养层的方法构建角膜上皮植片，实现临床上角膜缘干细胞缺损后的角膜上皮自体重建；本发明能够成功构建的人工角膜上皮植片，自体移植到角膜缘干细胞缺失的角膜表面，复明效果明显。在临床上具有广泛的应用潜力。

摘要： 一种以人角膜缘成纤维细胞为滋养层的人角膜缘干细胞—羊膜组织工程复合体，其特征在于：在组织学形态上接近人角膜上皮形态，在免疫学表型上与人角膜缘上皮类似，其超微结构显示细胞与细胞之间的连接发育成熟，上皮细胞与羊膜载体之间为紧密的粘连。其培养方法依照下列步骤完成：①人角膜缘干细胞的体外培养载体—羊膜的制备；②人角膜缘成纤维细胞滋养层的制备；③人角膜缘上皮细胞悬液的制备；④人角膜缘干细胞—羊膜复合体的培养。本人角膜缘干细胞—羊膜复合体优点是：具有和人角膜缘上皮相似的表型，为治疗角膜缘干细胞缺陷性眼表疾病提供了安全而有效的生物组织工程产品。