酶水解法制备水牛乳酪蛋白磷酸肽

摘要

酪蛋白磷酸肽是以乳酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再经分离纯化而得到的含有磷酸丝氨酰基的多肽。本实验以水牛乳酪蛋白为原料，制备水牛乳酪蛋白磷酸肽，可以深化水牛乳的深加工，丰富水牛乳乳制品，增加水牛乳的附加值。因此开展水牛乳酪蛋白磷酸肽的研究具有重要的价值。 经过单因素实验比较了Alcalase碱性蛋白酶和Neutrase中性蛋白酶对水牛乳酪蛋白水解度的影响。研究结果表明，Alcalase碱性蛋白酶的酶解效果较好。通过正交实验，优化出了Alcalase碱性蛋白酶酶解水牛乳酪蛋白的条件：温度为70℃，酸度为pH 7.0，酶：底物=3.0：100，底物浓度为5.0％。在该条件下水牛乳酪蛋白溶液的水解度可以达到20.05％。 通过酶解实验研究，确定了用Alcalase碱性蛋白酶制备水牛乳酪蛋白磷酸肽的工艺参数，用该法可制备出水牛乳酪蛋白磷酸肽粗品，粗品经分析检测表明：N/P摩尔比为20，水分含量6.5％，灰分含量8.0％。 采用离子交换层析技术，开展了水牛乳酪蛋白磷酸肽粗品纯化工艺研究，得到了纯化产品：经大孔强碱性阴离子交换树脂纯化得到的酪蛋白磷酸肽(CPP Ⅰ)的N/P摩尔比为4，经弱碱性阴离子交换树脂得到的酪蛋白磷酸肽(CPP Ⅱ)N/P摩尔比为6。该研究结果表明，通过离子交换技术可以精制水牛乳酪蛋白磷酸肽，而且大孔强碱性阴离子交换树脂的纯化效果更好。通过HPLC分析测定发现，粗品CPP、精制品CPP Ⅰ和CPP Ⅱ分别主要集中于1，260 Da、970 Da和1，090 Da分子量左右。 水牛乳酪蛋白磷酸肽的功能研究实验表明，酪蛋白磷酸肽可以有效地阻止磷酸钙、磷酸亚铁沉淀的形成，并且酪蛋白磷酸肽的N/P摩尔比越低，含量越高，阻止效果越好。在pH为8.0时有利于酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的形成；在100℃以下，温度的变化对酪蛋白磷酸肽的功能没有很大影响；柠檬酸与酪蛋白磷酸肽有一定的协同作用，在酪蛋白磷酸肽含量一定的情况下，增加柠檬酸的含量会阻止磷酸钙沉淀形成的时间；木糖醇与酪蛋白磷酸肽也具有一定的协同作用，可以阻止磷酸钙沉淀的形成。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

第1章 引言

1.1概述

1.2酪蛋白磷酸肽的结构

1.3酪蛋白磷酸肽的功能

1.3.1酪蛋白磷酸肽促进钙的吸收

1.3.2酪蛋白磷酸肽促进锌、镁、铁等的吸收

1.3.3酪蛋白磷酸抗龋齿机理

1.3.4促进动物体外受精

1.3.5增强免疫功能

1.3.6细胞凋亡诱导作用

1.3.7其它作用

1.4酪蛋白磷酸肽制备方法的现状

1.5酪蛋白磷酸肽的检测方法

1.6立题背景与研究内容

1.6.1立题背景

1.6.2研究内容

第2章 水牛乳酪蛋白磷酸肽的制备

2.1引言

2.2材料与设备

2.2.1试剂与材料

2.2.2设备

2.3实验方法

2.3.1酶的选择与正交试验的设计

2.3.2酪蛋白磷酸肽的分析与测定方法

2.4结果与讨论

2.4.1各水解参数对水解度的影响

2.4.2水牛乳酪蛋白磷酸肽的制备

2.5本章小结

第3章 水牛乳酪蛋白磷酸肽的纯化及分子量的测定

3.1引言

3.2材料与设备

3.2.1试剂与材料

3.2.2主要仪器

3.3实验方法

3.3.1酪蛋白磷酸肽初品的纯化

3.3.2酪蛋白磷酸肽分子量的测定

3.4结果与讨论

3.4.1大孔强碱性阴离子交换树脂纯化水牛乳酪蛋白磷酸肽粗品

3.4.2弱碱性阴离子交换树脂纯化酪蛋白磷酸肽粗品

3.4.3两种树脂纯化效果的比较

3.4.4酪蛋白磷酸肽粗品分子质量的分布

3.4.5经大孔强碱性阴离子交换树脂纯化后酪蛋白磷酸肽精制品分子质量的分布

3.4.6经弱碱性阴离子交换树脂纯化后酪蛋白磷酸肽精制品分子质量的分布

3.5本章小结

第4章 酪蛋白磷酸肽的功能特性及食品加工对其功能的影响

4.1引言

4.2材料与设备

4.2.1试剂与材料

4.2.2设备

4.3实验方法

4.3.1酪蛋白磷酸肽阻止钙离子沉淀的效果

4.3.2酪蛋白磷酸肽阻止亚铁离子沉淀的效果

4.3.3食品加工工艺对水牛乳酪蛋白磷酸肽功能的影响

4.4结果与讨论

4.4.1酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的效果

4.4.2酪蛋白磷酸肽阻止磷酸亚铁沉淀的效果

4.4.3酪蛋白磷酸肽的浓度对阻止磷酸钙沉淀的影响

4.4.4温度的变化对酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的影响

4.4.5 pH值对酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的影响

4.4.6柠檬酸对酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的影响

4.4.7木糖醇对酪蛋白磷酸肽阻止磷酸钙沉淀的影响

4.5本章小结

第5章 结论

致谢

参考文献

硕士期间成果