瞬时转染siRNA抑制大鼠神经干细胞内MMS2基因的表达

摘要

目的 建立有效的脂质体瞬时转染法,转染小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),沉默大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)内甲基磺酸敏感蛋白2(Methyl Methanesulfonate Sensitive 2,MMS2)的表达.方法 设计并化学合成针对MMS2基因的3对siRNA分子序列,采用阳离子脂质体法瞬时转染NSCs,运用实时荧光定量PCR检测NSCs内MMS2基因mRNA的表达.结果 MMS2-siRNA对大鼠 NSCs 内MMS2基因的沉默效果在转染后36 h达到最大抑制作用;3对特异性MMS2-siRNA序列均有效地抑制了MMS2基因的表达,沉默效率分别为siRNA_A(58±5)%、siRNA_B(64±6)%、siRNA_C(84±3)%,与空白对照组相比均存在显著性差异(P＜0.05);siRNA_C沉默效率最高.结论 靶向MMS2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制NSCs内MMS2基因的表达,为后续相关研究提供实验方法.