脂质体瞬时转染siRNA抑制肾小管上皮细胞AngⅡ 1型受体表达

摘要

目的建立有效的脂质体瞬时转染法,转染小分子RNA(siRNA),抑制人肾小管上皮细胞(human kidneytubular epithelial cells,HKC)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)的表达。方法针对人AT1R mRNA135到156位点,由美国Ambion公司设计并合成AT1R siRNA序列,以脂质体法瞬时转染至HKC,利用RT-PCR及Western blot技术检测HKC内AT1R mRNA及蛋白表达。结果AT1R siRNA转染对人肾小管上皮细胞AT1R的抑制效果在48h达到最大抑制作用;转染后,HKC细胞AT1R mRNA表达下调(68.5±6.4)%,AT1R蛋白表达下调(80.7±5.3)%,与对照组比较存在显著性差异(P<0.001)。使用AngⅡ刺激,特异性AT1R siRNA转染组AT1R表达明显下降,无转染及非特异性转染组AT1R表达升高。特异性AT1R siRNA转染HKC细胞后,其炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达明显下降。结论本研究利用脂质体瞬时转染siRNA方法,成功抑制肾小管上皮细胞表达AT1R,为后续相关研究提供实验方法。