凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达

摘要

目的:构建人凝血因子FⅧ中具有免疫活性的C2结构域表达载体并通过真核宿主细胞表达出多肽.方法:从HEK293细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增获得目的片段.将该片段与信号肽共同构建在同一表达载体,并在NIH3T3细胞中表达,Western blotting检测.结果:经限制性酶切鉴定和测序分析证实,采用RT-PCR成功地完成FⅧ-C2 cDNA的扩增和表达载体的构建,重组载体转染进入NIH3T3细胞后,经检测培养上清中的蛋白成分证实,成功地表达出FⅧ-C2结构域多肽.结论:重组表达载体的构建是表达出分泌型FⅧC2多肽的一种可行的方法.