pcDNA3．1/myc-His-DJ-1M261真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达的研究

摘要

目的：构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达质载体,为进一步研究DJ-1M26I基因的功能及建立转基因动物模型奠定基础。方法：采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3-1/myc-His-DJM26I重组表达质载体,采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平鉴定。结果：pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,经PCR检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组。结论：成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达质载体。