生长抑素噬菌体展示鼠源单链抗体库的构建与鉴定

摘要

应用噬菌体表面展示技术,从生长抑素免疫的BALB/C小鼠(Mus musculus)脾脏中提取总RNA,用RT-PCR技术反转录成cDNA,通过PCR扩增出抗体重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,再用编码(G1y4Ser)3的Linker在体外将VH和VL连接成单链抗体(ScFv)基因,克隆到噬菌粒载体pCANTABSE中,电转化至感受态的大肠杆菌(Escherichia coli)TG1,经辅助噬菌体M13K07超感染,形成噬菌体单链抗体库.经检测,噬菌体的滴度为3.5x1011pfu,有效库容为9.3×107.随机挑取20个克隆,PCR方法测定文库重组率为85%,小规模选取阳性克隆测序分析表明,均含有ScFv基闪的完整序列,基本满足建库的要求.