酪蛋白水解物中ACE抑制肽分离及氨基酸序列分析

摘要

以牛乳酪蛋白为底物,先经胃蛋白酶水解,再经胰蛋白酶水解,从水解物中分离获得血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽并确定其氨基酸序列.酪蛋白的双酶水解物经超滤和葡聚糖凝胶色谱分离,分离得到3个组分,收集高ACE活性抑制效果组分Ⅱ和Ⅲ.采用离子色谱法分析水解片段的氨基酸组成,液相色谱-质谱法分析水解片段的氨基酸序列,采用固相合成法制备获得的短肽片段,用分光光度法检测ACE活-性抑制效果.结果表明,组分Ⅱ包含缬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、酪氨酸,共8种氨基酸,组分Ⅲ包含痕量的丝氨酸和酪氨酸;将组分Ⅱ和Ⅲ经液相色谱-质谱分析,获得8个片段,其中,αs2-f(56～57)∶YS、αs2-f (98～107)∶YQKFPQYLQY和κ-f (52～61)∶INNQFLPYPY具有ACE活性抑制作用,其IC50值分别为11.89、l1.75 μg/mL和421 μg/mL.