干酪乳清酶解产物抗氧化肽的分离和纯化

摘要

干酪乳清Alcalase 2.4L酶解的最优条件,即酶解时间为2h、pH 9.5、酶与底物比为4％、酶解温度为50℃.利用超滤、葡聚糖凝胶层析和三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,tricine SDS-PAGE)等方法从干酪乳清中提取抗氧化性蛋白肽.分别考察操作压力、料液温度、料液pH值、操作时间对超滤膜膜通量的影响.乳清酶解物超滤的最佳条件为:压力0.25 MPa、温度30℃、时间120 min、初始pH 9.0.分子质量4000～6 000D肽的水解液脂质过氧化抑制率最高,达到47.28％.利用Sephadex G-50型葡聚糖凝胶进行纯化,将分离的组分进行Tricine-SDS-PAGE分析和脂质过氧化抑制率的测定.第34管洗脱液的脂质过氧化抑制率最高,分子质量范围为4 000～4 100D.