鲜马乳乳清蛋白质组成及其抗氧化肽的分离纯化研究

摘要

目的：采用柱色谱和SDS-PAGE电泳分离和鉴定马乳、牛乳、驴乳、驼乳乳清蛋白组成差异，并分离纯化鲜马乳乳源性生物活性肽，初步检测其生物活性，为鲜马乳功能研究提供依据。
　　方法：(1)将四种鲜乳高速离心，分离乳清蛋白，采用离子交换层析和SDS-PAGE电泳方法，对四种不同鲜乳乳清蛋白组分进行鉴别，揭示其差异蛋白。(2)鲜马乳乳清蛋白酶解液分别用3Kd、10Kd、30Kd的超滤管进行富集并检测其抗氧化活性；选择活性较强的肽段采用SephadexG-75和RP-HPLC进行纯化， MALDI-TOF/TOF进行结构鉴定，获得抗氧化活性肽。(3)采用MTT法测定鲜马乳抗氧化肽对人肺癌细胞系A549增殖的抑制作用，流式细胞仪检测其细胞周期和凋亡，通过检测GSH、SOD、MDA指标，揭示其氧抗氧化能力。
　　结果：(1)鲜马乳蛋白与鲜牛乳蛋白组分相比较，发现其中存在三种已知蛋白，分子质量分别为69.60KD、46.22KD和26.35KD；与鲜驴乳蛋白组分相比较，发现其中存在三种已知蛋白，分子质量分别为100.92KD、69.60KD和76.31KD；与鲜驼乳蛋白组分相比较，发现其中存在四种已知蛋白，分子质量分别为100.92KD、95.56KD、26.35KD和76.31KD。(2)马乳乳清酶解物经过超滤、Sephadex G-75葡聚糖凝和半制备RP-HPLC分离纯化， MALDI-TOF/TOF质谱结构鉴定，初步确定抗氧化肽的分子量为1594.89KD，氨基酸组成为VAPFPQPVVPYPQR。(3)MTT法实验结果表明，抗氧化肽能抑制A549细胞增殖，将其阻滞在G1期，明显提高细胞凋亡，与模型组对比抗氧化肽高、中剂量组增加GSH含量和SOD的活力，降低MDA的分泌量，差异显著，具有统计学意义（P<0.05）。
　　结论:(1)通过检测发现，鲜马乳与驼乳、驴乳、牛乳乳清蛋白组成具有一定的差异性。(2)通过分离纯化和结构鉴定获得分子量为1594.89 KD，氨基酸组成为VAPFPQPVVPYPQR的鲜马乳乳源性抗氧化活性肽。(3)抗氧化肽抑制A549肺癌细胞增殖，增加GSH含量，提高SOD活力，降低MDA分泌量，具有一定的抗氧化活性。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

1 四种鲜乳蛋白质组分差异研究

1.1 仪器与试剂

1.2 试验方法

1.3 试验结果

1.4 讨论

2 鲜马乳粉抗氧化活性肽分离、纯化、结构鉴定

2.1 仪器与试药

2.2 试验方法

2.3 试验结果

2.4 讨论

3 抗氧化肽通过氧化应激作用对人肺癌细胞A549的抑制作用

3.1 仪器与试药

3.2 试验方法

3.3 试验结果

3.4 讨论

小结

致谢

参考文献

综述:乳源性生物活性肽的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

导师评阅表