泡菜中高产蛋白酶乳酸菌的筛选鉴定及其酶学特性初步研究

摘要

从传统泡菜中分离得到16株乳杆菌株,通过脱脂乳平板试验,从中初步筛选出12株产蛋白酶的菌株,通过复筛得到1株高产蛋白酶菌株L4.采用PCR技术对该菌株进行鉴定,通过硫酸铵盐析、透析袋透析收集胞外产物,以交联葡聚糖凝胶G-75层析纯化蛋白酶,以SDS-PAGE电泳确定蛋白酶分子量,同时对不同条件下蛋白酶的酶学特性进行研究.结果表明,该菌株的碱基序列与多株植物乳杆菌相应的16S rDNA序列99％相似,鉴定其为植物乳杆菌;蛋白酶分子量为40 kDa,在pH为9时胞外蛋白酶活性最高,其最适温度为50～ 60℃.酶活抑制试验显示Ca2+、Ba2+、Zn2+、EDTA能大大抑制该蛋白酶活性,而Mg2+、Mn2+、Ca2+、PMSF对胞外蛋白酶活力影响不大.