雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响

摘要

背景：雌激素受体β基因参与骨代谢的研究较少,其对骨代谢的具体调节机制仍不清楚。目的：分析雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。方法：实验分3组：空白对照组（即hFOB 1.19,未感染任何反转录病毒）、阴性对照组（即含无效干扰片断雌激素受体β-shRNA-nc）、最佳RNAi组（即ERβ-sh RNA-3）。将前期最佳RNAi组的雌激素受体β-shRNA反转录病毒载体感染人成骨细胞,通过抗性筛选并扩大培养,利用MTT法检测雌激素受体β稳定抑制后对细胞增殖的影响;随后在雌激素干预下,通过Western blot技术检测雌激素受体β蛋白表达的稳定抑制效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot技术检测雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。结果与结论：①成功筛选出稳定感染ERβ-shR NA-3反转录病毒载体的人成骨细胞,MTT法检测显示雌激素受体β稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响（P〉0.05）;②在雌激素干预下,雌激素受体β蛋白的抑制率为（93.11±0.57）%（P〈0.05）,且雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1 mR NA和蛋白的上调率分别为（26.65±3.81）%和（23.79±3.76）%,骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白的上调率分别为（16.62±1.71）%和（18.08±3.20）%（均P〈0.05）;③结果提示雌激素受体β可能通过调控转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2的表达在骨代谢中发挥作用。