实时荧光跨越式滚环等温扩增熔解曲线法检测复合调味料中的沙门氏菌

摘要

复合调味料食用方便、口味多样,具有巨大的市场发展潜力,但相关食品安全问题也时有发生.该研究建立了实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence-saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)熔解曲线法检测复合调味料中沙门氏菌的方法.RF-SRCA反应完成后,通过熔解曲线法检测沙门氏菌,可排除引物二聚体或非特异产物对检测结果的影响,准确直观地判定检测结果.进行引物特异性验证,并对灵敏度和人工污染样品的检出限进行分析.结果表明,该方法能有效检测沙门氏菌,14株沙门氏菌均为阳性结果,熔解峰形一致,且Tm值范围稳定,25株非沙门氏菌均为阴性结果.RF-SRCA熔解曲线方法的灵敏度为6 fg/μL,较实时荧光PCR(real-time fluorescence-PCR,RF-PCR)灵敏度高出100倍.检出限为4.6×100 CFU/g,比RF-PCR低100倍.与RF-PCR方法相比,RF-SRCA检测方法灵敏度更高,检出限更低.因此,该研究建立的RF-SRCA熔解曲线方法可对复合调味料中沙门氏菌实现快速、准确、特异、灵敏的检测.