α-硫辛酸对白细胞介素1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

摘要

目的 探讨α-硫辛酸(ALA)调控微小RNA-877(miR-877)/N-myc下游调节基因2(NDRG2)分子轴对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其机制.方法 本研究于2019年1月至2019年7月在南充市中心医院风湿免疫科实验室完成.分离培养SD大鼠膝关节软骨细胞,按照随机数字表法分为对照(Con)组、IL-1β组、IL-1β+ALA-低剂量(L)组、IL-1β+ALA-中剂量(M)组、IL-1β+ALA-高剂量(H)组、IL-1β+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、IL-1β+miR-877抑制物(anti-miR-877)组、IL-1β+空载体质粒(pcDNA)组和IL-1β+NDRG2过表达质粒(pcDNA-NDRG2)组、IL-1β+ALA+miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)组和IL-1β+ALA+miR-877组.流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的分泌量,蛋白质印记(western blot)法检测NDRG2蛋白的表达水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-877和NDRG2 mRNA的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和western blot检测miR-877和NDRG2的靶向调控关系.结果 与Con组比较,IL-1β组软骨细胞IL-6[(3.27±0.31)比(1.06±0.09)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌增加,miR-877[(2.65±0.24)比(1.02±0.09)]表达升高,NDRG2[(0.21±0.03)比(0.69±0.06)]表达降低,细胞凋亡率[(0.69±0.06)比(6.24±0.63)％]升高(均P<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+ALA-L组、IL-1β+ALA-M组、IL-1β+ALA-H组软骨细胞IL-6[(2.91±0.25),(2.33±0.23),(1.65±0.16)比(3.27±0.31)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,miR-877[(2.21±0.19),(1.96±0.17),(1.43±0.14)比(2.65±0.24)]的表达降低,NDRG2[(0.34±0.03),(0.46±0.04),(0.58±0.05)比(0.21±0.03)]表达升高,细胞凋亡率[(20.13±2.12),(16.32±1.63),(11.04±1.15)比(27.62±2.43)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+anti-miR-877组软骨细胞IL-6[(1.38±0.14)比(3.34±0.33)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(12.54±1.25)比(27.14±2.73)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组比较,IL-1β+pcDNA-NDRG2组软骨细胞IL-6[(1.43±0.15)比(3.47±0.34)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(13.55±1.35)比(28.14±2.83)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+ALA+miR-NC组相比,IL-1β+ALA+miR-877组软骨细胞IL-6[(3.01±0.29)比(1.42±0.13)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌升高,细胞凋亡率[(25.47±2.53)比(11.68±1.87)]％增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 α-硫辛酸能够减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制与调控miR-877/NDRG2通路有关.