miR-214-5p靶向SIRT2介导白细胞介素-1β诱导软骨细胞损伤的机制研究

摘要

目的 探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其分子机制.方法 分离培养SD大鼠关节软骨细胞,用IL-1β处理细胞,采用qRT-PCR与Western blot检测miR-214-5p与SIRT2表达.软骨细胞分别转染anti-miR-214-5p、pcDNA-SIRT2,检测IL-1β诱导后细胞中miR-214-5p与SIRT2表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡.利用生物信息学预测miR-214-5p的靶基因,应用双荧光素酶报告实验及Western blot方法对靶基因进行验证.将si-SIRT2转染软骨细胞,检测IL-1β诱导后软骨细胞凋亡率.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量;采用Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2表达.结果 IL-1β处理软骨细胞后,细胞中miR-214-5p表达水平升高,SIRT2表达水平降低;IL-1β 处理后的软骨细胞凋亡增多,IL-6、TNF-α、IFN-γ 含量与Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低;抑制miR-214-5p表达或SIRT2过表达的软骨细胞经IL-1β诱导后,细胞凋亡率降低,IL-6、TNF-α、IFN-γ含量与Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高;miR-214-5p过表达可抑制含miR-214-5p结合位点荧光报告载体的强度,将结合位点突变后抑制作用消失;抑制SIRT2表达可逆转抑制miR-214-5p表达对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用.结论 抑制miR-214-5p表达可靶向SIRT2对IL-1β诱导的软骨细胞损伤发挥保护作用,其作用机制与减少软骨细胞凋亡及抑制炎性反应有关.