中国毛虾（Acetes Chinensis）蛋白水解物中血管紧张素转移酶抑制肽的研究

摘要

本文首先用胰蛋白酶、S5317酸性蛋白酶、黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶、3942中性蛋白酶、2709碱性蛋白酶五种酶酶解中国毛虾蛋白，通过分析水解产物的可溶性氮、总氮、对血管紧张素转移酶(ACE)的抑制活性，选取黄海黄杆菌低温碱性酶和3942中性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶。分别做黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶和3942中性蛋白酶酶解中国毛虾蛋白的正交试验，对水解条件进行优化，得到ACE抑制活性最高的黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶酶解产物F4和中性蛋白酶酶解产物F7。F4和F7组分的IC50值分别为5mg/mL和8.6mg/mL。F4和F7组分味道鲜美，能够抵抗人体消化酶和ACE的水解，而保持较高的ACE抑制活性，可以满足具有防治ACE引发的高血压作用的功能食品的风味及稳定性要求。 考察体外具有ACE抑制活性的中国毛虾蛋白酶解产物F4和F7对肾血管性高血压大鼠的急性降血压效果。两肾—夹型建立肾血管性高血压大鼠模型，测定其血压和血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量变化。结果显示F4及F7组分显著地降低了肾血管性高血压大鼠的动脉血压。两种组分也降低了高血压大鼠血浆中的AngⅡ水平，表明抑制AngⅡ生成是中国毛虾蛋白酶解产物急性降压作用的降压机制之一。 对具有体外和体内活性的中国毛虾蛋白酶解产物F4和F7进行分离纯化，制备ACE抑制肽。用截留分子量1000和2000的透析袋透析F4后，发现F4组分中抑制ACE的肽主要为分子量小于1000的肽。用SephadexG-15和SP-SephadexC-50进一步对分子量小于1000的组分进行分离纯化，取活性最好的峰，最后用反相高压液相C18制备柱纯化得到单一组分FIA。通过氨基酸组成和氨基酸结构分析，确认FIA为新型的ACE抑制肽Pro-Arg-Tyr。先后采用层析柱SephadexG-25、SP-SephadexC-50对F7组分进行分离，选取ACE抑制活性最高的峰进一步用反相高压液相色谱C18制备柱进行纯化得到单一组分FI，经氨基酸组成和氨基酸结构分析确定FI为新型的ACE抑制肽Ser-Pro。用Lineweaver-Burk法做ACE的酶反应动力学曲线，考察Pro-Arg-Tyr和Ser-Pro抑制ACE的模式，结果显示这两种ACE抑制肽竞争性的抑制ACE与底物的结合。 本文也对中国毛虾的发酵产品—虾酱中的ACE抑制剂进行了研究。通过水提取、水提取后80％乙醇处理以及无水乙醇直接提取三种提取方式处理虾酱分别得到样品HWE、HWEE80和Eg0。结果显示HWE、HWEE80和E80都具有较好的ACE抑制活性，并且对人体消化酶具有一定的抵制能力，被ACE酶解30min后抑制ACE的活性上升。

目录

文摘

英文文摘

前言

1.食源ACE抑制肽的研究方法

2.食源ACE抑制肽的体外测定方法

3.食源ACE抑制肽的体内活性

4.食源ACE抑制肽的构效关系

5.食源ACE抑制肽抑制ACE的模式

6.食源ACE抑制肽的应用和研究前景

第一章血管紧张素转移酶抑制肽的制备

1.实验材料和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2实验结果

2.1 ACE抑制活性测定方法中反应时间的确定

2.2最佳酶的选取

2.3 3 942中性蛋白酶酶解条件的优化

2.4黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶酶解条件的优化

2.5 F4和F7组分的氨基酸组成

2.6 F7和F4组分的抗消化能力

2.7 F4和F7组分的ACE酶解实验

3讨论

第二章中国毛虾(Acetes Chinensis)酶解产物的急性降压作用

1.材料与方法

1.1实验材料和仪器

1.2实验方法

1.3数据处理

2结果

2.1中国毛虾蛋白酶解产物F4和F7对肾血管性高血压大鼠血压的影响

2.2中国毛虾蛋白酶解产物对肾血管性高血压大鼠AngⅡ水平的影响

3讨论

第三章血管紧张素转移酶抑制肽的分离、纯化及鉴定

1.实验材料和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2实验结果

2.1 F4组分的分离、纯化及鉴定

2.2 F4组分的分离、纯化及鉴定

2.3 ACE抑制肽抑制模式的研究

3讨论

第四章中国毛虾发酵食品—虾酱的提取液中血管紧张素转移酶抑制肽的研究

1.实验材料和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2实验结果

2.1几种市售海产加工品的水提物的ACE抑制活性的研究

2.2 HWE、HWEE80和E80的ACE活性的研究

2.3 HWE、HWEE80和E80的氨基酸组成

2.4 HWE、HWEE80和E80的抗消化能力

2.5 HWE、HWEE80和E80的ACE酶解实验

3讨论

参考文献

致谢