一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法

摘要

本发明涉及蓝莓花青素性能改性技术领域，尤其是一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，通过对酚酸试剂进行制备，再将酚酸试剂对蓝莓花青素进行改性处理，酰化度较高，使得酰化度达到了53-70％；并且整个工艺流程短，工艺参数易于控制，原料易得，反应条件温和，无污染物排放，进而制作的成本较低；使得改性后的蓝莓花青素对自由基的清除功能得到显著的增强，进而增强了蓝莓花青素的抗氧化性能，提高了蓝莓花青素的稳定性，能够被广泛应用于食品、保健品、化妆品、医药等领域。

说明书

技术领域

本发明涉及蓝莓花青素性能改性技术领域，尤其是一种蓝莓花青 素抗氧化性能增强方法。

背景技术

蓝莓花青素是从蓝莓果或叶中提取得到的一种重要活性成分，具 有增强视力、消除眼睛疲劳、延缓脑神经衰老、增强心肺、预防老年 痴呆的功能，对由糖尿病引起的毛细管病、艾滋病等有治疗作用。作 为一种纯天然的抗衰老的营养补充剂，花青素被研究证明是当今人类 发现最有效的抗氧化剂，在欧洲，它被称为“口服的皮肤化妆品”，其 抗氧化性能比维生素E高出50倍，比维生素C高出200倍，且对人体的 生物有效性是100％，服用后20分钟就能在血液中检测到。

与其它抗氧化剂不同的是，花青素能通过血脑屏障，直接保护大 脑和神经系统。然而，花青素不稳定、易降解变质、贮藏期短，使其 应用受到了很大地限制，也是当前蓝莓研究中亟待解决的难题。

于是，有研究者将蓝莓花青素的稳定性作出了研究与探讨，并提 供了提高蓝莓花青素稳定性的手段，如专利号为《CN201310421249.5》 的一种提高蓝莓花青素稳定性的处理方法，通过将0.5％三氯乙酸的甲 醇溶液进行蓝莓花青素的提取，依次通过离子交换树脂柱和葡萄糖凝 胶柱进行纯化后，获得蓝莓花青素精制物，再将其与三乙酰没食子酸 酰氯进行没食子酸酰化反应，在其分子结构中引入具有邻三酚羟基的 没食子酰基，获得改性产物没食子酰化花青素，再通过高效液相色谱 法测定改性产物水解后生成的没食子酸量，计算没食子酰化度为 52-63％。再经过实验进行验证，获得稳定性较高的蓝莓花青素，并且 操作简单、成本低、污染少、酰化度高，通过分子修饰，一方面提高 了蓝莓花青素的原有特性，如抗氧化性能得到增强，使其作用效果提 高；另外一方面通过引入多种官能团进而赋予蓝莓花青素新的生理活 性，扩大了蓝莓花青素的应用范围。

由此可见，对于蓝莓花青素稳定性的提高以及蓝莓花青素进行酰 化反应能够改性蓝莓花青素，使得蓝莓花青素的各项性能得到提高和 增强，如增强蓝莓花青素的抗氧化性能等。同时，也可以从上述的现 有技术文献中看出，蓝莓花青素中的稳定性以及各项性能的增强，尤 其是抗氧化性能的增强过程中，对于如何制取酰化试剂以及在何种条 件下进行改性处理以及酰化试剂的种类选取均有较大的影响。

花青素(anthocyanidin)又称花色素，是一类水溶性的类黄酮类天 然色素，属酚类化合物，基本结构单元为2-苯基苯并吡喃阳离子，其 结构式如下：

其由于近些年来科学家的 大量研究，获得酚类化合物对于抗氧化性能具有独特的功效，其抗氧 化性能的活性较高，能与维生素C、E和胡萝卜素等其他抗氧化物在 体内一起发挥抗氧化功效，清除有害人体健康的坏分子，即自由基， 进而达到良好的抗氧化功效。

但是，由于蓝莓花青素存在上述稳定性较差的缺陷，现有技术中 大量的研究人员对蓝莓花青素作出的稳定性改性处理时，由于酰化试 剂的选取以及制备酰化试剂的条件以及对蓝莓花青素进行改性处理 过程的条件控制不恰当，进而导致对蓝莓花青素的改性处理达不到较 佳的效果，进而导致蓝莓花青素的稳定性和各项性能的优化程度还不 够，如抗氧化性能的增强程度较低，进而导致蓝莓花青素的应用受到 局限性。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种蓝莓 花青素抗氧化性能增强方法，工艺步骤简单、处理成本较低、无污染 物质产生，对蓝莓花青素的稳定性和抗氧化性性能的提高具有显著的 进步性，相比传统技术的蓝莓花青素的处理方式来看，对蓝莓花青素 的酰化度提高了7个百分点。

具体是通过以下技术方案得以实现的：

一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步骤：

(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1： (1-6)：(1-6)进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用50-70r/min 的搅拌速度进行搅拌处理20-30min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化 的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：(1-5)进行混合，并在氮气 存在的30-100℃的温度下采用搅拌速度为80-100r/min搅拌反应 1-24h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再 将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的 1-1.5倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其 中采用50-80r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅 拌3-5h，调节PH值为7-9，获得酚酸试剂；

(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚 酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为1：(3-10)加入到二氧六环中，同 时缓慢滴加摩尔比为(3-10)的三乙胺，搅拌速度为70-80r/min，在 30-60℃下搅拌反应2-12h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再 向其中加入盐酸调整PH值为1-4，并将其依次进行过滤、水洗、真空 干燥，即可得到改性蓝莓花青素。

所述的酚酸为水杨酸、尼泊金酸、原儿茶酸、焦儿茶酸、龙胆酸、 没食子酸、对香豆酸、咖啡酸中的一种。

所述的非质子溶剂是二氯甲烷、甲苯、四氯化碳、三氯甲烷中的 一种。

所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为 30～50％的精制物。

所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。

所述的氢氧化钠溶液的质量分数为20-30％。

所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1-1.5倍。

所述的盐酸的质量分数为10-15％。

所述的真空干燥的真空度为0.02-0.08MPa。

其中的过滤可以是采用反渗透膜进行过滤处理，也可以是采用超 滤膜进行过滤处理，还可以是采用纳滤膜进行过滤处理；除此之外， 过滤还可以是采用多种过滤技术相结合的方式进行的过滤，如先采用 纳滤膜进行纳滤处理之后，再将其采用超滤膜进行超滤处理，超滤处 理完成之后，再采用反渗透膜技术进行反渗透膜过滤处理，并且在处 理过程中，可以将环境条件控制在超临界状态下进行，并且通过实验 证明，在超临界环境中进行处理获得的改性蓝莓花青素的各项性能优 于一般环境中进行的，尤其是抗氧化性能的提高。

同时，本发明中采用的氮气的量为足以达到保护目的时即可，进 而降低了氮气的用量，降低了成本；而氮气的最佳用量为混合溶液量 的0.7-1.1倍摩尔量。

本发明在制得改性的蓝莓花青素后，采用KBr压片法，利用傅里 叶变换红外光谱仪对蓝莓花青素和酚酸酰化花青素进行红外光谱扫 描，波长范围从400～4000cm^-1，分辨率在2cm^-1，将得到的谱图进行比 较和鉴别，进而得出如图2所示的比较结果，进而达到对改性后的蓝 莓花青素和原始的蓝莓花青素的区分对比。

再采用HPLC，对酚酸酰化花青素的酰化度进行测定。将酚酸酰 化的花青素溶于质量分数10％的氢氧化钠溶液中，水解完全后，采用 HPLC标品对照法测定水解液中酚酸含量，并计算酚酸酰化度。可以 得知其酰化度达到了53-70％，可见其酰化度较高。

本发明还进行了改性后的蓝莓花青素分别进行1，1-二苯基-2-苦 基苯肼清除(DPPH)、超氧阴离子清除(O2-·)、羟自由基清除(·OH)、 H2O2清除、金属离子络合、抗油脂氧化、抗卵磷脂过氧化等实验来 判定酚酸酰化花青素的自由基清除和抗氧化性能。并且得出，改性后 的蓝莓花青素对自由基的清除功能和抗氧化性能均得到较大程度的 提高，并且改性后的蓝莓花青素的稳定性能得到显著的提高。

本发明中的水洗是每进行过滤一次，就进行2-3次水洗。

本发明还提供一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法制得的改性 蓝莓花青素的应用，改性蓝莓花青素应用于食品、保健品、化妆品、 医药领域。

与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：

本发明通过对酚酸试剂进行制备，再将酚酸试剂对蓝莓花青素进 行改性处理，酰化度较高，使得酰化度达到了53-70％；并且整个工艺 流程短，工艺参数易于控制，原料易得，反应条件温和，无污染物排 放，进而制作的成本较低；使得改性后的蓝莓花青素对自由基的清除 功能得到显著的增强，进而增强了蓝莓花青素的抗氧化性能，提高了 蓝莓花青素的稳定性，能够被广泛应用于食品、保健品、化妆品、医 药等领域。

附图说明

图1为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强的流程示意图。

图2为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强的前后的红外光谱 图。

1-未通过性能改性处理的蓝莓花青素处理结果；

2-通过性能改性处理的蓝莓花青素处理结果。

图3为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法的蓝莓花青素对 自由基清除效果与传统的采用Vc清除自由基和未经过改性处理的蓝 莓花青素清除自由基的结果。

具体实施方式

下面结合附图和具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一 步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。

实施例1

如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步 骤：

(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1： 1：1进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用50r/min的搅拌速度 进行搅拌处理20min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水 氯化亚砜按照摩尔比为1：1进行混合，并在氮气存在的30℃的温度下 采用搅拌速度为80r/min搅拌反应1h，再采用非质子溶剂重结晶处理， 获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的 量为乙酰化的酚酸酰氯的1倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将 其置于冰浴中，并向其中采用50r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧 化钠溶液，并持续搅拌3h，调节PH值为7，获得酚酸试剂；

(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚 酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为3：1加入到二氧六环中，同时缓慢 滴加摩尔比为3的三乙胺，搅拌速度为70，在30℃下搅拌反应2h，对 其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为 1，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青 素。

所述的酚酸为水杨酸。

所述的非质子溶剂是二氯甲烷。

所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为30％ 的精制物。

所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。

所述的氢氧化钠溶液的质量分数为20％。

所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1倍。

所述的盐酸的质量分数为10％。

所述的真空干燥的真空度为0.02MPa。

实施例2

如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步 骤：

(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1： 6：6进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用70r/min的搅拌速度 进行搅拌处理30min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水 氯化亚砜按照摩尔比为1：5进行混合，并在氮气存在的100℃的温度 下采用搅拌速度为100r/min搅拌反应24h，再采用非质子溶剂重结晶 处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶， 丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1.5倍的重量，并将其搅拌混合均匀 后，再将其置于冰浴中，并向其中采用80r/min的搅拌速度边搅拌边 滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌5h，调节PH值为9，获得酚酸试剂；

(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚 酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为8：1加入到二氧六环中，同时缓慢 滴加摩尔比为8的三乙胺，搅拌速度为80r/min，在60℃下搅拌反应 10h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整 PH值为3，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝 莓花青素。

所述的酚酸为原儿茶酸。

所述的非质子溶剂是甲苯。

所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为50％ 的精制物。

所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。

所述的氢氧化钠溶液的质量分数为30％。

所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1.5倍。

所述的盐酸的质量分数为15％。

所述的真空干燥的真空度为0.08MPa。

实施例3

如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步 骤：

(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1： 3：3进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用60r/min的搅拌速度 进行搅拌处理25min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水 氯化亚砜按照摩尔比为1：3进行混合，并在氮气存在的50℃的温度下 采用搅拌速度为90r/min搅拌反应12h，再采用非质子溶剂重结晶处 理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙 酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1.3倍的重量，并将其搅拌混合均匀后， 再将其置于冰浴中，并向其中采用70r/min的搅拌速度边搅拌边滴加 氢氧化钠溶液，并持续搅拌4h，调节PH值为8，获得酚酸试剂；

(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚 酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢 滴加摩尔比为7的三乙胺，搅拌速度为75r/min，在40℃下搅拌反应7h， 对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值 为4，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花 青素。

所述的酚酸为焦儿茶酸。

所述的非质子溶剂是三氯甲烷。

所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为40％ 的精制物。

所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。

所述的氢氧化钠溶液的质量分数为25％。

所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1.1倍。

所述的盐酸的质量分数为13％。

所述的真空干燥的真空度为0.05MPa。

实施例4

如图1所示，将无水尼泊金酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：1.2： 1.2的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例1的步骤1) 得到乙酰化的尼泊金酸。按1：1.5的摩尔比将乙酰化的尼泊金酸和无 水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应3小时， 减压旋蒸，用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的尼 泊金酰氯。按实施例1的步骤(1)得到尼泊金酰氯。在氮气保护下， 将制备得到的尼泊金酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧 六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，35℃回流反应5小时，减 压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2，过滤，水洗，真 空干燥，得到尼泊金酰化花青素。

采用KBr压片法，利用傅里叶变换红外光谱仪对蓝莓花青素和尼 泊金酰化花青素进行红外光谱扫描，波长范围从4000～400cm^-1，分辨 率在2cm^-1，将得到的谱图进行比较和鉴别。见附图2，其特征峰：3450 左右为芳香环和糖基上的羟基伸缩振动峰，2925左右为亚甲基伸缩振 动峰，1780左右为羰基伸缩振动峰，1620、1520、1440左右为苯环和 杂环骨架结构的伸缩振动峰，1320、1200、1180左右为C-O-C基团的 伸缩振动峰，这些都证明：尼泊金酰化花青素的合成是成功的。

利用HPLC，对尼泊金酰化花青素的酰化度进行测定。将尼泊金 酰化的花青素溶于质量分数10％的氢氧化钠溶液中，在氮气保护下， 室温搅拌水解完全后，采用HPLC标品对照法测定水解液中尼泊金酸 含量，以飞燕草素-3-O-葡萄糖苷中酚羟基全部酰化时定位酰化度 100％。计算尼泊金酰化度为70％。

将制备得到的尼泊金酰化花青素进行DPPH(1，1-二苯基-2-苦基 苯肼)清除实验，其半抑制浓度(IC50)为19.5μg/mL。采用紫外可 见分光光度计测定蓝莓花青素及尼泊金酰化花青素和抗坏血酸的 DPPH清除效率见附图3。通过比较可知，尼泊金酰化花青素可显著提 高蓝莓花青素的DPPH清除能力。

实施例5

将无水原儿茶酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2.5：2.5的摩尔比 加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例2的步骤(1)得到乙酰 化的原儿茶酸。按1：2.5的摩尔比将乙酰化的原儿茶酸和无水氯化亚 砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，70℃搅拌回流反应5小时，减压旋 蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的原儿茶酰 氯。按实施例2的步骤(1)得到原儿茶酰氯。在氮气保护下，将制备 得到的原儿茶酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为5：1加入到二氧六环 中，同时缓慢滴加摩尔比为5的三乙胺，45℃回流反应4小时，减压蒸 出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3.5，过滤，水洗，真空 干燥，得到原儿茶酸酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算原儿茶酸酰化度为59％。采用 紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素及其衍生物和抗坏血酸的超氧 阴离子(O2-·)清除效果，它们的半抑制浓度(IC50)分别为27.8μg/mL、 16.8μg/mL、51.5μg/mL。可见，原儿茶酸酰化花青素可显著提高蓝莓 花青素的O2-·清除能力。

实施例6

将无水没食子酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：3.5：3.5的摩尔比 加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰 化的没食子酸。按1：3.5的摩尔比将乙酰化的没食子酸和无水氯化亚 砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应3.5小时，减压 旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的没食子 酰氯。按实施例3的步骤(1)得到没食子酸酰氯。在氮气保护下，将 制备得到的没食子酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六 环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，50℃回流反应3小时，减压 蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2，过滤，水洗，真空 干燥，得到没食子酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算没食子酰化度为65％。以Fe3+ 离子为实验对象，分别考察蓝莓花青素和没食子酰化花青素络合金属 离子的能力。向5mL蓝莓花青素和没食子酰化花青素溶液中加入氯化 铁试液，达到络合饱和时，Fe3+的用量分别为1.305mg和2.583mg，可 见没食子酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的金属离子络合能力。

实施例7

将无水对香豆酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2：2的摩尔比加 入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例1的步骤(1)得到乙酰化 的对香豆酸。按1：1.5的摩尔比将乙酰化的对香豆酸和无水氯化亚砜 加入到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应2小时，减压旋蒸， 用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的对香豆酰氯。 按实施例1的步骤(1)得到对香豆酰氯。在氮气保护下，将制备得到 的对香豆酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同 时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，40℃回流反应4小时，减压蒸出二氧 六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得 到对香豆酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算对香豆酰化度为66％。按照 GB5009.37-2003《食用植物油卫生标准的分析方法》分别考察蓝莓花 青素和对香豆酰化花青素的油脂抗氧化能力。每隔24小时取样分析它 们的过氧化值(POV,meq/kg)，得出与蓝莓花青素相比，对香豆酰化花 青素对不饱和油脂的抗氧化作用得到明显提高。

实施例8

将无水咖啡酸、无水乙酸酐、无水吡啶按按1：2.5：2.5的摩尔比 加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰 化的咖啡酸。按1：2的摩尔比将乙酰化的咖啡酸和无水氯化亚砜加入 到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应4小时，减压旋蒸，用 三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的咖啡酰氯。按实 施例3的步骤(1)得到咖啡酰氯。在氮气保护下，将制备得到的咖啡 酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6.5：1加入到二氧六环中，同时缓慢 滴加摩尔比为6.5的三乙胺，50℃回流反应8小时，减压蒸出二氧六环 和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2.5，过滤，水洗，真空干燥，得到 咖啡酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算咖啡酸酰化度为64％。利用铁 离子诱导卵磷脂脂质体过氧化模型，进行蓝莓花青素、咖啡酰化花青 素和抗坏血酸的抗氧化活性评价，得出它们抑制脂质过氧化的IC50 值分别218.9、165.3、1075.5μg/mL。可见咖啡酰化花青素具有很强 的抑制脂质过氧化活性。

实施例9

将无水2,3,4-三羟基苯甲酸、无水乙酸酐、无水吡啶按按1：4.5： 4.5的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例2的步骤 (1)得到2,3,4-三乙酰化的苯甲酸。按1：5的摩尔比将2,3,4-三乙酰化 的苯甲酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，90℃搅拌回 流反应8小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥， 得到2,3,4-三乙酰化的苯甲酰氯。按实施例2的步骤(1)得到2,3,4-三 羟基苯甲酰氯。在氮气保护下，将制备得到的2,3,4-三羟基苯甲酰氯 与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩 尔比为6的三乙胺，55℃回流反应4小时，减压蒸出二氧六环和吡啶， 加适量稀盐酸调pH为2.5，过滤，水洗，真空干燥，得到2,3,4-三羟基 苯甲酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算2,3,4-三羟基苯甲酸酰化度为 36％。采用紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素及其衍生物的羟自由 基(·OH)清除效果，它们的半抑制浓度(IC50)分别为2.68μg/mL和、 1.80μg/mL。可见，2,3,4-三羟基苯甲酰化花青素可显著提高蓝莓花青 素的·OH清除能力。

实施例10

将无水水杨酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2.1：2.1的摩尔比加 入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化 的水杨酸。按1：2.5的摩尔比将乙酰化的水杨酸和无水氯化亚砜加入 到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应5小时，减压旋蒸，用 三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的水杨酰氯。按实 施例3的步骤(1)得到水杨酰氯。将制备得到的水杨酰氯与蓝莓花青 素按照摩尔比为8：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为8的 三乙胺，50℃回流反应10小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量 稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得到水杨酰化花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算水杨酸酰化度为59％。进行 DPPH清除实验，测得蓝莓花青素及水杨酰化花青素DPPH的IC50分别 为32.9μg/mL和24.1μg/mL。可知，水杨酰化花青素可明显提高蓝莓花 青素的DPPH清除能力。

实施例11

将无水焦儿茶酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：3：3的摩尔比加 入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化 的焦儿茶酸。按1：3的摩尔比将乙酰化的焦儿茶酸和无水氯化亚砜加 入到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应5小时，减压旋蒸， 用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的焦儿茶酰氯。 按实施例3的步骤(1)得到焦儿茶酰氯。将制备得到的焦儿茶酰氯与 蓝莓花青素按照摩尔比为5：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔 比为5的三乙胺，55℃回流反应5小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺， 加适量稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得到焦儿茶酸酰化 花青素。

参照实施例4进行结构鉴定，计算焦儿茶酸酰化度为53％。采用 紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素、焦儿茶酸酰化花青素和抗坏血 酸的H₂O₂清除效果，它们的IC50分别为2.60μg/mL、1.83μg/mL、 12.0μg/mL。可见，焦儿茶酸酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的H₂O₂清除能力。

在此有必要指出的是，上述实施例和实验处理结果仅限于对本发明的 技术方案和本发明的技术方案所能够达到的技术效果做进一步的阐 述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本领域技术 人员在此基础上做出的非突出的实质性特征和非显著进步的改进，均 属于本发明的保护范畴。