响应面法优化嗜热链球菌AR333电转化条件

摘要

[背景]嗜热链球菌AR333是本实验室从发酵乳中筛选出的一株高产活性胞外多糖乳酸菌.[目的]建立嗜热链球菌AR333高效电转化体系.[方法]通过单因素试验和Box-Behnken响应面法优化电转化条件.[结果]嗜热链球菌AR333最优电转化条件为甘氨酸浓度8.3g/L,OD600为0.8,10％甘油(体积比)和0.5 mol/L蔗糖的电转缓冲液,pIB 184质粒80 ng,电场强度14 kV/cm,0.4 mol/L山梨醇、2 rnmol/L CaCl2和20 mmol/L MgCl2的LM17复苏培养基,复苏时间5h.[结论]在最优电转化条件下,嗜热链球菌AR333电转化效率达到3.68×105 CFU/μg-DNA,比优化前提高了14倍,实现了嗜热链球菌AR333的高效遗传转化,为其功能解析和基因工程改造奠定基础.