青鱼γ-干扰素基因的克隆与表达分析

摘要

[目的]开展青鱼γ-干扰素(IFN-γ)基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究.[方法]采用cDNA末端快速扩增技术获得了青鱼(Mylopharyngodonpiceus)IFN-γ基因cDNA的5'和3'末端序列,然后根据其末端序列设计特异性引物,扩增得到青鱼IFN-γ基因cDNA全长序列,对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析,同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析.通过构建真核表达载体,将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析.[结果]青鱼IFN-γ cDNA全长为895 bp,其开放阅读框大小为549 bp,编码182个氨基酸.氨基酸序列比对分析结果显示,青鱼IFN-γ与人、鸡、鼠IFN-γ的序列相似性仅为1.5％～7.7％,与其他鱼类IFN-γ序列相似性较高,为16.3％～92.9％.青鱼IFN-γ分子N末端包含1个信号肽序列、C末端有IFNγ特征序列([I/V]-QX-[K/Q]-A-X2-E-[L/F]-X2-[I/V])以及核定位基序(RRRR).青鱼IFN-γ蛋白二级结构与高等脊椎动物IFN-γ类似,包含7个α螺旋结构.经Poly I:C诱导后发现,IFN-γ在青鱼头肾、肾、脾、皮肤和鳃组织中表达显著上调,最高的为头肾,其次为脾、皮肤、鳃和肾,而在心脏和脑组织中无显著变化.青鱼γ-干扰素真核表达质粒在青鱼鳍条组织细胞中成功表达IFN-γ.[结论]成功克隆了青鱼IFN-γ基因cDNA,经Poly I:C诱导后,该基因在头肾中上调倍数最为显著,青鱼γ-干扰素在体外获得表达.