利拉鲁肽对高糖诱导足细胞损伤后相关蛋白mRNA和蛋白表达的影响及其机制

摘要

目的:观察胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂利拉鲁肽对高糖诱导足细胞损伤后相关蛋白mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法:将分化成熟的足细胞随机分为对照组、高糖组、甘露醇对照组、利拉鲁肽组和高糖+利拉鲁肽组.提取各组细胞RNA,应用Real-time PCR(RT-PCR)法检测各组足细胞中Nephrin、Podocin和ZO-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Nephrin、Podocin、ZO-1、Bcl-2和caspase-3蛋白表达水平,免疫荧光法观察足细胞中骨架蛋白Synaptopodin表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率.将分化成熟的足细胞随机分为对照组、高糖组、高糖+利拉鲁肽组、高糖+利拉鲁肽+LY294002组.采用Western blotting法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路转导蛋白、Bcl-2和caspase-3表达水平.结果:与对照组比较,高糖组足细胞中标志蛋白Nephrin、Podocin和ZO-1 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),足细胞特异性骨架蛋白Synaptopodin荧光强度明显降低(P<0.05),足细胞凋亡率明显升高(P<0.05).与高糖组比较,高糖+利拉鲁肽组足细胞中Nephrin、Podocin和ZO-1 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05),caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05),足细胞特异性骨架蛋白Synaptopodin荧光强度明显升高(P<0.05),足细胞凋亡率明显降低(P<0.05).与对照组比较,高糖组足细胞中PI3K和pAkt蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05);与高糖组比较,高糖+利拉鲁肽组足细胞内PI3K和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05),caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05),与高糖+利拉鲁肽组比较,高糖+利拉鲁肽+LY294002组足细胞中PI3K和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:利拉鲁肽通过激活PI3K/Akt信号通路抑制足细胞凋亡,减轻高糖诱导的足细胞损伤.