利拉鲁肽调节Sirtuin表达对高糖诱导的人内皮集落形成细胞生物学行为的影响

摘要

目的 探索利拉鲁肽是否通过调节Sirtuin影响高糖诱导的人内皮集落形成细胞(ECFC)的生物学行为.方法 采用密度梯度离心法从外周血中分离获取单个核细胞,用EBM-2诱导培养出ECFC,随机分为正糖组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、渗透压组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖),均处理6d.随后采用EdU实验、Transwell实验、成管实验、β-半乳糖苷酶实验分别测定ECFC的增殖、迁移、成管及衰老情况,采用免疫印迹法测定Sirtuins(Sirtuin1–7)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素的表达水平.研究利拉鲁肽对ECFC的影响时,将细胞分为4组,除上述正糖组与高糖组外,还设有正糖利拉鲁肽干预组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+100 nmol/L利拉鲁肽)、高糖利拉鲁肽干预组(30 mmol/L D-葡萄糖+100 nmol/L利拉鲁肽),均处理6d,观察4组细胞的生物学行为变化并测定VEGF和血管生成素的表达水平.结果 EdU实验显示高糖组的细胞增殖率明显低于正糖组[(30.16±12.36)％vs.(88.00±13.77)％],Transwell实验显示高糖组的细胞迁移能力明显低于正糖组(25.11±6.05vs.64.89±10.73),成管实验显示高糖组细胞成管能力明显低于正糖组(27.50±3.90vs.69.61±5.48),β-半乳糖苷酶染色实验显示高糖组细胞衰老率明显高于正糖组[(87.63±9.63)％vs.(71.35±7.58)％],差异均有统计学意义(P<0.05).高糖情况下,Sirtuins家族表达普遍降低,VEGF和血管生成素表达均显著下降(P<0.05),Sirtuin1的表达随利拉鲁肽浓度的升高而升高.予以适宜浓度的利拉鲁肽干预后,VEGF和血管生成素的表达均明显增加(P<0.05).EdU实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞增殖率明显高于正糖组[(54.09±27.29)％vs.(29.01±7.56)％],Transwell实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞迁移能力明显高于高糖组(32.25±4.99vs.21.75±3.10),成管实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞成管能力明显高于高糖组(69.61±8.11 vs.39.85±5.78),β-半乳糖苷酶染色实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞衰老率明显低于高糖组[(52.06±7.94)％vs.(69.03±1.57)％],差异均有统计学意义(P<0.05).结论 高糖可降低ECFC的增殖、迁移和成管能力,增加细胞衰老比例,降低Sirtuins、VEGF和血管生成素的表达;利拉鲁肽可逆转高糖导致的ECFC生物学行为改变,同时上调Sirtuin1、VEGF及血管生成素的表达.