雷诺嗪预处理对缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞自噬的调控及对心肌细胞的保护作用

摘要

目的:探讨雷诺嗪预处理对缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞的保护作用,从自噬调控角度阐明雷诺嗪保护缺血再灌注损伤心肌的作用机制.方法:将H9C2心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧/复氧模型组、雷诺嗪预处理组、雷诺嗪+渥曼青霉素组、雷帕霉素组.正常对照组细胞不做任何处理,其余各组H9C2细胞以相应药物预处理30 min后,行缺氧4 h、复氧3 h处理.采用CCK-8法检测各组H9C2细胞活性,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组H9C2细胞中LDH活性,免疫荧光法检测各组H9C2细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)阳性表达率,Western blotting法检测各组H9C2细胞中LC3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平,计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-mTOR/mTOR比值.结果:与缺氧/复氧模型组比较,雷诺嗪预处理组和雷帕霉素组H9C2细胞活性升高(P<0.01),H9C2细胞中LDH活性降低(P<0.01),LC3阳性表达率升高(P<0.05).Western blotting法检测,与正常对照组比较,缺氧/复氧模型组H9C2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值降低(P<0.01);与缺氧/复氧模型组比较,雷诺嗪预处理组和雷帕霉素组H9C2细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值降低(P<0.01).结论:雷诺嗪预处理对缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与雷诺嗪抑制mTOR蛋白磷酸化从而诱导缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬有关联.