摘要:目的:HBSC11(Methyl pyrazolo[1,5-a]pyridine-2-carboxylate)是吡唑[1,5-a]并吡啶-2-甲酸甲酯,我们的前期研究发现该化合物具有良好的体外抗乙肝病毒的活性,本实验在前期工作基础上继续深入验证HBSC11的体内外抗病毒活性及细胞毒性,发现由于其结构中含有酯键,体内代谢不稳定易水解,故后续设计合成一系列吡唑[1,5-a]并吡啶-2-甲酰胺类化合物以提高其稳定性并评价其抗乙肝病毒活性,为后续进行成药性研究打下基础,为我国非核苷类抗乙肝病毒新药研制提供新思路. 方法:通过Schrodinger公司的GLIDE组件预测了HBSC11与La蛋白结合模式后确定HBSC11中吡唑环上的氮原子以及酯键中的羰基氧原子分别与Ile140以及Asn139主链上的N原子形成氢键发挥作用.我们从市售的HBSC11出发,保留其具有活性的骨架结构,先在碱性条件下将其酯键水解转化为羧酸,然后在多肽缩合剂HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)作用下与相应的胺类化合物进行偶联形成酰胺键.我们通过酰胺键的形成分别引入了疏水、亲水及含有芳香环的基团,经多步反应合成10个衍生化合物NHBSC1-10.获得化合物后,以拉米夫定和HBSC11作为阳性对照药,在HepG2.2.15细胞株中分别于24h、48h、72h对11种化合物进行DNA水平初筛候选化合物. 结果:通过化学合成并纯化得到10个吡唑[1,5-a]并吡啶-2-甲酰胺类化合物,产物结构经核磁氢谱,碳谱及高分辨质谱鉴定,HPLC纯度均大于98.5%.HBSC11在体外的抗病毒活性与细胞毒性实验结果表明,HBSC11在500nmol·L-1时抗病毒活性好且细胞毒性小.初步构效关系表明,先导化合物HBSC11、衍生物NHBSC7、NHBSC4、NHBSC9化合物对HepG2.2.15细胞在24h,48h的HBV DNA表达水平上有比较明显的抑制效果,但在72h抑制效果不再明显. 结论:在24h和48h内,先导化合物HBSC11最优,衍生物NHBSC7、NHBSC4、NHBSC9化合物对HepG2.2.15细胞在24h,48h也有比较明显的抑制效果,它们的R基团均为亲脂性,且取代基较小,课题组研究推测小分子亲脂性的R基团起效快.同时对比R基团小但亲水的NHBSC2,在48h后出现明显抑制效果,将NHBSC9中的苯环用吡啶环替代后获得的NHBSC10也在48h后出现明显抑制效果,或许在取代基结构上再进行优化,调整亲水亲油平衡值,将能得到一个具有开发前景的非核苷类抗乙肝病毒新药.