不对称合成苯乳酸的酮酸还原酶基因克隆和表达

摘要

采用分子克隆手段从基因组数据库中获得5个可以不对称还原苯丙酮酸合成手性苯乳酸的酮酸还原酶,并在大肠杆菌BI21(DE3)中成功表达.比较5个重组酮酸还原酶的酶活、转化率、ee值等指标,来源于干酪乳杆菌的酮酸还原酶LcKAR表现出最高的比活力和选择性.纯酶LcKAR的比活力为0.32 U/mg,在不对称还原反应中遵循Prelog规则,产物为(R)-苯乳酸,且ee＞99％.对重组大肠杆菌BL21 (DE3)/pET28a-LcKAR的培养基及发酵条件进行优化,最适培养条件为种龄6h,接种体积分数为3％,诱导剂IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导时间为5h,经发酵培养后LcKAR的发酵酶活达到2.17x103U/L.