罗非鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其启动子活性的初步检测

摘要

采用高保真PCR技术从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)基因组中分离了β-肌动蛋白(β-actin)基因片段(GenBank登录号:EF026001).序列分析显示该片段包括长为1 643 bp β-actin基因5'端侧翼区的启动调控区和90 bp的部分转录区序列.启动调控区包括一段长为108 bp β-actin基因上游调控序列、β-actin基因不翻译的第1个外显子和第1个内含子.上游调控序列中含有与转录活性密切相关的作用元件:CAAT box,TATA box和CArG box,分别位于转录起始位点上游的-92、-29和-62处.将尼罗罗非鱼β-actin基因的启动调控区定向克隆到不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed2-1中,构建了重组荧光表达载体.重组载体经EcoR I线性化后,采用显微注射技术将其注射到唐鱼(Tanichthys albonubes)的受精卵中.利用荧光显微镜观察外源基因增强型红色荧光蛋白基因(DsRed2)在唐鱼中的表达.结果表明,在荧光显微镜下以及普通解剖镜下均可观察到红色荧光,说明本实验分离到的罗非鱼β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能.