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第一章 文献综述
1.启动子克隆方法的研究进展
1.1 启动子及其结构模型
1.2 启动子克隆的几种方法
1.3 启动子克隆的意义
2.鱼类生长激素基因的研究进展
2.1 鱼类生长激素的结构特征和功能
2.2 鱼类生长激素的分离及活性检测
2.3 我国鱼类生长激素基因的研究现状
2.4 鱼类生长激素基因研究展望
第二章 β-actin基因启动子与GH基因克隆与活性研究
1.前言
2.实验材料
3.实验步骤
3.1 尼罗罗非鱼采血方法
3.2 罗非鱼脑垂体总RNA的提取及检测
3.3 基因组DNA的提取及检测
3.4 RT-PCR扩增
3.5 PCR扩增
3.6 DNA的纯化和回收
3.7 克隆
3.8 质粒DNA的提取
3.9 阳性克隆的鉴定
4.细胞转染
4.1 材料与试剂
4.2 pEGFP-β-actin启动子表达质粒构建
4.3 pEGFP-GH融合蛋白表达质粒构建
4.4 细胞转染
4.5 EGFP与293细胞
5.实验结果
5.1 尼罗罗非鱼β-actin基因启动子功能验证结果
5.2 GH基因与EGFP基因融合表达载体的构建及在真核细胞中表达
6.讨论
6.1 尼罗罗非鱼β-actin基因启动子功能验证结果讨论
6.2 GH基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在真核细胞中表达结果讨论
第三章 太湖鲢鱼mtDNA D-loop区遗传多样性
1.前言
2.材料和方法
2.1 材料
2.2 基因组DNA的提取
2.3 mtDNA D-loop区的PCR扩增
2.4 PCR产物纯化与目的片断的克隆及测序
2.5 数据处理
3.结果
3.1 PCR扩增及阳性克隆鉴定
3.2 D-loop区序列多态性及核苷酸变异频率
3.3 单倍型系统发育树构建
4.讨论
4.1 太湖鲢鱼mtDNA D-loop序列多态分析
4.2 太湖鲢鱼系统发育分析
全文结论
参考文献
附录:试验试剂及配置
攻读学位期间发表的学术论文
致谢