靶向CD19嵌合抗原受体T细胞体外构建、扩增及抗肿瘤活性研究

摘要

目的 探索特异性靶向CD 19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞的构建与制备方法,并研究其体外杀伤靶细胞的效果.方法 通过基因合成和分子克隆手段构建靶向CD19-CAR片段并将其插入pLenti6.3慢病毒载体,利用293FT悬浮细胞系包装慢病毒并转染人外周血单个核细胞来源的CD3+T细胞.通过流式细胞术鉴定转染效率,并通过实时无标记细胞分析法和细胞计数试剂盒8检测靶向CD19-CAR-T细胞体外杀伤效果.结果 获得了表达抗CD19的单链抗体基因的慢病毒,病毒滴度可达3.2×108噬斑形成单位/ml.经慢病毒转染的CD3+T细胞在体外培养14 d后,细胞扩增效率达(60.2±11.5)倍,靶向CD19-CAR-T细胞阳性率达90.57％.经检测,靶向CD19-CAR-T细胞均可有效杀伤CD19+靶细胞.结论 建立了基于无血清悬浮细胞系的靶向CD19-CAR慢病毒包装系统,成功构建靶向CD19的CAR-T细胞,该细胞能特异性杀伤CD19+肿瘤细胞.