果胶裂解酶、木聚糖酶及果胶裂解酶、木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

摘要

运用RT-PCR技术,从绿色木霉(AS3.3711) mRNA中扩增出木聚糖酶基因xyn2,并与质粒pPIC9K相连,构建了表达载体pPIC9K-xyn2,转化毕赤酵母GS115,并且将pPIC9K-xyn2和pPIC9K-PelC(果胶裂解酶)同时转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,分别得到一株高表达术聚糖酶毕赤酵母菌株X5和一株同时高表达木聚糖酶和果胶裂解酶毕赤酵母菌株PX6.同时,将一株高表达果胶裂解酶毕赤酵母菌株P2保存.重组酶酶学性质分析表明,P2和PX6分泌果胶裂解酶,X5和PX6分泌木聚精酶最适温度均为50℃;P2分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为14.2U/mL;X5分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为5.8 U/mL:PX6分泌果胶裂解酶最适pH5.4,最大酶活为12.6 U/mL,分泌木聚糖酶最适pH6.0,最大酶活为4.2 U/mL.