嗜酸芽孢杆菌普鲁兰酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化

摘要

为了在3L发酵罐水平上提高重组菌E.coli BL 21(DE3)/ pET20b(+)-BapulA的普鲁兰酶的表达量和胞外分泌,将嗜酸芽孢杆菌普鲁兰酶(Bacillus acidopullul yticus)在大肠杆菌中进行重组表达,并在3L发酵罐水平上对重组菌进行发酵优化,考察了发酵条件对重组酶表达的影响.重组菌发酵的最佳条件为:发酵前期菌体生长温度和pH分别为30℃和7.0,当菌体浓度OD600达到50时,发酵温度降低至25℃,此时调节pH为6.2,同时开始流加乳糖[0.4 g/(L·h)]进行诱导;在发酵过程中,当菌体浓度OD600依次达到15,45,75时,分别加入浓度为1.5 g/L的甘氨酸,当菌体OD600为105时,再加入浓度为3 g/L的甘氨酸.发酵结束后普鲁兰酶的胞外酶活达659.0 U/mL,最高总酶活达1 910.1 U/mL,与摇瓶的初始总酶活(41.1 U/mL)和胞外酶活(6.5 U/mL)相比,分别提高了45.4倍和100倍.