黄曲霉转录因子AfMcrA的克隆及功能预测

摘要

为初步探究黄曲霉McrA的生物学功能,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)克隆黄曲霉转录因子AfMcrA基因,并对其编码蛋白的理化性质、保守结构域、亚细胞定位、二级结构等进行预测.实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reac-tion,qRT-PCR)对不同培养时间AfMcrA的表达情况进行分析.结果表明,AfMcrA基因全长1448 bp,由3个内含子和4个外显子组成.cDNA为1101 bp,编码366个氨基酸.生物信息学预测,AfMcrA是一个分子质量为39.82 kDa,理论等电点为8.97,不稳定的亲水蛋白,且不含信号肽和跨膜结构域;AfMcrA具有一个高度保守的Zn(Ⅱ)2 Cys6锌指结构域,属于C6转录转因子;PredictNLS预测AfMcrA亚细胞定位于细胞核中;AfMcrA二级结构主要由无规则卷曲组成,延伸链、α-螺旋和 β-转角含量较低.qRT-PCR结果显示,AfMcrA的相对表达量在培养6 d时达到峰值,分别为培养2 d和8 d的15.79倍和14.76倍.结合qRT-PCR结果及已报道McrA的功能,推测AfMcrA可能参与黄曲霉次级代谢产物合成的调控.