玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响

摘要

目的 探讨玻璃化冻存技术对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响.方法 对兔关节软骨细胞进行玻璃化冻存法(A组)、程序性降温法(B组)及梯度降温法(C组)低温保存,以新鲜未冷冻的兔关节软骨细胞作为对照组(D组),采用流式细胞仪检测各组兔关节软骨细胞存活率和凋亡率,通过改良Alcianblue染色沉淀法评估其生物活性改变.结果 A组兔关节软骨细胞存活率为(86.6±1.7)％,明显高于B组的(79.4±3.1)％以及C组的(62.1±8.4)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；A组、C组的凋亡率[(7.9±3.2)％、(7.3±6.2)％]明显低于B组的(14.0±5.2)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；A组上清液中糖胺多糖(GAG)浓度为(29.4±2.9) ng/mL,明显高于B组的(18.5±4.1) ng/mL以及C组的(19.4±6.3) ng/mL(P ＜0.05).结论 与传统程序性降温法、梯度降温法比较,玻璃化冻存法能显著提高冷冻保存复苏后兔关节软骨细胞的存活率,并能维持关节软骨细胞的生物活性,是一种较为理想的软骨细胞低温保存方法.