玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响

摘要

研究背景：关节软骨的低温保存对同种异体关节软骨的移植至关重要，传统的程序性降温法及梯度降温法不仅操作繁琐，且复苏后细胞的存活率及其代谢活性不高。玻璃化法是近年来新发展起来的一种低温保存技术，目前已经成功的保存了血液、胚胎、血管等细胞或组织。国内对于关节软骨细胞的玻璃化冻存亦初见报道，但是其检测方法比较简单，且没有与传统的冷冻保存方法相比较，不能有力的说明玻璃化冻存的优势所在。本实验采用玻璃化冻存法对关节软骨细胞进行低温保存，并与传统的程序性降温法及梯度降温法进行比较。通过比较复苏后软骨细胞的存活率、总凋亡率及其合成糖胺多糖的能力，评价3种不同的低温保存方法对关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响。
　　目的：1.探索玻璃化冻存法对兔关节软骨细胞的保存效果；2.比较3种不同的低温保存方法对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响。
　　方法：分别采用玻璃化冻存法、程序性降温法及梯度降温法对兔关节软骨细胞进行低温保存，采用流式细胞仪计数及阿尔新蓝染色等方法了解复苏后软骨细胞的存活率、凋亡率及其生物学活性。
　　结果：采用玻璃化冻存法保存的关节软骨细胞存活率约87％，与新鲜未冷冻组相比无显著性差异（P>0.05），但明显高于程序性降温法及梯度降温法（P<0.05）；玻璃化冻存对软骨细胞合成糖胺多糖的能力有一定影响，但与新鲜未冷冻组相比，无显著性差异（P>0.05），而程序性降温组及梯度降温组细胞合成糖胺多糖的能力均明显下降，与新鲜未冷冻组相比差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1.兔关节软骨细胞可以通过玻璃化冻存法进行低温保存，复苏后其存活率及生物学活性接近于新鲜未冷冻细胞；2.玻璃化冻存对关节软骨细胞的保存效果优于传统的程序性降温法及梯度降温法。

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中英文缩略词表

前 言

材料与方法

1 主要试剂及仪器

2 兔关节软骨细胞的分离与培养

3 冷冻保护剂的组成及配制

4 低温保存的方法

5 复苏

6 检测指标

7 统计学方法

结 果

1关节软骨细胞存活率

2 软骨细胞总凋亡率

3 GAG含量测定

讨 论

结 论

参考文献

综述

攻读学位期间发表论文情况

致谢

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