重组2型腺相关病毒介导锰超氧化物歧化酶转染大鼠耳蜗血管纹缘细胞的研究

摘要

目的 探讨以重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes 2,rAAV2)为载体对体外培养的大鼠耳蜗血管纹缘细胞(Marginal cells,MCs)转染锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD),获得高表达MnSOD转基因缘细胞的可行性.方法 实验组按感染复数(MOI)为104v.g./cell对体外培养的血管纹缘细胞转染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时设转染rAAV2-EGFP缘细胞作为空载对照组.未转染细胞为空白对照组.荧光显微镜下每2d观察1次MCs的绿色荧光蛋白(Enhenced green fluorescent protein,EGFP)表达情况.比色法测定各组MCs的MnSOD活性.激光共聚焦显微镜下观察转染rAAV2-MnSOD-EGFP后MnSOD的表达,免疫印迹法(Western blot)定量分析MnSOD的表达.结果 (1) 各组MCs转染后,生长正常,空载对照组MCs转染rAAV2-EGFP后2天开始出现微弱EGFP的表达.1周后至高峰;实验组转染rAAV2-MnSOD-EGFP后4 d出现EGFP的表达,10 d至高峰,且持续表达于细胞培养的整个期间.EGFP的表达在荧光显微镜490 nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质.(2)对激光共聚焦显微镜及Western blot的检测结果进行分析,实验组较空载对照组和空白对照组的MCs中MnSOD的表达明显升高.差异有统计学意义.结论 rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs并持续高表达MnSOD.