建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子的转基因小鼠

摘要

目的为了研究异种移植,建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子(DAF)的转基因小鼠.方法采用受精卵显微注射技术,将含有人内皮细胞粘附分子-2(ICAM-2)基因启动子、人DAF cDNA(插有人DAF基因第一个内含子)、SV40splice/polyA的外源基因导入小鼠受精卵的原核中;选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩.聚合酶链(PCR)技术及Southern印迹杂交法确定外源基因整合阳性转基因小鼠.RT-PCR方法和流式细胞术分别用于外源基因mRNA及蛋白质水平表达的检测.免疫组织化学方法观察人DAF在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官的表达分布.采用Langendorff心脏灌流装置,用200 g/L的稀释人血清灌注转基因小鼠离体心脏,检测其抗超急性排斥反应能力.结果共产仔鼠133只,21只整合有外源基因,整合率16%(21/133).8只实现mRNA及蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人DAF基因在人白细胞表达强度的70%至95%,转基因效率6%(8/133).免疫组织化学法显示人DAF在转基因小鼠器官组织切片上有较强表达,且表达限于血管内皮细胞.与普通鼠对比,转基因小鼠离体心脏存活时间明显延长,且60 min 灌注期间内做功仍维持在最大值20%以上.结论成功地建立了血管内皮细胞组织特异性表达人DAF的转基因小鼠.这种小鼠有一定的抗超急性排斥反应能力.