环介导等温扩增对人乳头瘤病毒可视化分型检测

摘要

目的 应用环介导等温扩增(LAMP)可视化检测人乳头瘤病毒(HPV)16、18、52、58亚型,探索LAMP技术在基层或现场的使用前景.方法 首先,收集临床疑似HPV感染患者的宫颈脱落细胞标本.然后分别根据HPV16、18、52、58亚型E6、E7区域设计LAMP引物并优化反应体系,通过扩增不同亚型的模板验证这引物的特异性,并通过检测经过一系列稀释后的模板分析其灵敏度,同时在体系中加入钙黄绿素并将显色结果与电泳图对比以验证可视化结果的准确性.最后对临床标本分别用LAMP及PCR进行分型检测,将两种方式的结果进行一致性分析,比较两种方式有无统计学差异.结果 优化好的LAMP体系特异性较好,对HPV16、18、52、58亚型的检测限分别为100、103、100、103 IU/μL.另外,加入钙黄绿素后肉眼判定的效果和电泳效果相同.通过对临床样本分型检测的得出,LAMP与PCR的统计学差异不明显(Kappa值=0.854).结论 LAMP具有较好的灵敏度及特异性,可检测未经纯化的HPV病毒,适合条件简陋的基层或现场检测.