miR-145对TNF-α诱导人关节软骨细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响

摘要

目的明确miR-145在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人关节软骨细胞增殖、凋亡及炎症反应中的作用。方法利用0、5、10、15及30 ng/ml TNF-α诱导人C-20/A4和CH8关节软骨细胞48 h,提取总RNA并反转录,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-145的表达水平。瞬时转染miR-145模拟物(mimics)至30 ng/ml TNF-α诱导的人C-20/A4和CH8细胞,分别采用噻唑蓝比色法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]、蛋白质印迹及酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)观察细胞增殖、凋亡及炎症因子浓度的变化。结果随着TNF-α诱导浓度的提高,C-20/A4和CH8细胞中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6及IL-13的浓度呈剂量依赖性升高(P<0.05),而miR-145的表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-145 mimics显著提高C-20/A4和CH8细胞中miR-145的表达水平(P<0.05)。与对照组相比较,miR-145 mimics显著降低C-20/A4和CH8细胞增殖能力,并增加胱天蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,BAX)的表达水平及IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P<0.05)。结论miR-145在TNF-α诱导的人关节软骨细胞中呈剂量依赖性下调。体外过表达miR-145抑制TNF-α诱导的人关节软骨细胞增殖,促进凋亡及炎症反应。