固相萃取-高效液相色谱荧光检测法测定人血浆3-硝基酪氨酸含量

摘要

建立了人血浆中痕量3-硝基酪氨酸的高效液相色谱-荧光检测法. 血浆经乙腈沉淀蛋白后,上清液用氮气吹干,残渣复溶后过C18固相萃取小柱净化浓缩,洗脱液再用氮气吹干,残渣进行荧光衍生化反应.采用高效液相色谱分离,荧光检测器检测,外标法定量.3-硝基酪氨酸在0.50～50.0 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数为0.9999;样品加标绝对回收率为89.3%～91.9%,相对回收率为99.2%～107.9%;日内相对标准偏差为1.46%～4.79%,日间相对标准偏差为2.75%～9.20%;在血浆中检出限为0.25 nmol/L;测定正常人血浆中3-硝基酪氨酸平均浓度为118 nmol/L(n=21),Ⅱ型糖尿病病人血浆中3-NT平均浓度为3.63 nmol/L(n=23).本方法灵敏度高,重现性好,适用于临床研究中大样本量的测定.