hWAPL基因多态性与宫颈癌发生危险性研究

摘要

背景及目的：　　 宫颈癌(cervical cancer)是女性最常见的生殖道恶性肿瘤之一，在全球范围内，每年约有20多万女性死于宫颈癌，目前宫颈癌仍然是导致我国妇女死亡的主要原因之一，我国每年新发现131500个病例，且宫颈癌的发生率有上升和年轻化趋势。　　 WAPL(wing-apart like)蛋白作为一种新的调控异染色体结构的基因产物，首先在果蝇体内被证实。研究表明人体内WAPL的同源基因产物hWAPL(humanwing-apart like)蛋白是一种凝集蛋白结合蛋白，它通过与凝集蛋白的调节亚基直接相互作用，使凝集蛋白在细胞分裂初期从染色体臂及时分离。hWAPL基因在宫颈癌中呈现高表达，并且hWAPL基因表达水平与宫颈病变程度呈正相关。　　 在人类疾病中，很多疾病是由基因变异导致的，单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，是人类基因组遗传变异中最普遍的形式。其中，能代表其它位点信息的SNP位点称为标签SNP(tagSNP)，少数几个tagSNP就能够提供该区域内大多数的遗传多态模式，从而大大提高关联分析的有效性，即通过较少的SNP位点达到更强的统计学效果。　　 目前，一些文献都揭示了WAPL基因与宫颈癌之间存在着某种关联性，然而关于WAPL基因上的SNP位点与宫颈癌之间的关联性研究国内外尚未见有报道。本课题的目的是通过检测hWAPL基因tagSNP在汉族妇女宫颈癌患者的分布特点，筛查可能与宫颈癌发病相关的tagSNP位点，为进一步发现宫颈癌的发病原因及预防和治疗提供线索。　　 材料和方法：　　 收集2008年8月至2009年10月河南省六家市级及省级医院300例同期住院妇女的抗凝全血标本，病例组150例，血标本来自经常规病理确诊的宫颈癌患者，患者采血前均未进行化疗或放疗，其中宫颈鳞状细胞癌132例，宫颈腺癌18例，年龄23岁～67岁，平均年龄48岁；对照组150例，血标本取自同期住院的宫颈正常的患者，其中子宫肌瘤129例，盆腔脏器脱垂21例，年龄27岁～78岁，平均年龄53岁。所有妇女均为汉族人。　　 应用离心柱型全血基因组DNA快速提取试剂盒提取300例含0.4％EDTAK2(乙二胺四乙酸二钾)的抗凝全血的DNA。琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)技术及凝胶成像系统对提取的全血DNA进行检测和质量控制。应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)检测技术对选出的hWAPL基因的12个tagSNPs位点进行检测应用。应用SPSS15.0和Haploview4.2软件统计对hWAPL基因基因型、等位基因型和单体型的数据进行统计分析，初步筛选与宫颈癌相关的hWAPL基因的tagSNPs位点。其中，基因型与等位基因型分布频率用x2检验，同时计算OR值和95％可信区间(CI)，所有检验均为双侧检验，检验水准α=0.05。　　 结果：　　 1本报告所涉及的所有SNP位点等位基因和基因型的观察值和期望值吻合良好，均符合Hardy-Weinberg平衡定律。　　 2病例组和对照组中，hWAPL基因的SNP位点rs11595882的危险等位基因位点T(0.163:0.073，x2=11.36，P=0.001，OR=2.481)、rs10887621的危险等位基因位点C(0.880:0.820，x2=4.235，P=0.040，OR=1.610)、rs11202058的危险等位基因位点G(0.800:0.730，x2=4.088，P=0.043，OR=1.479)，在病例组中的频率明显高于对照组。　　 3危险型基因型与非危险型基因型频数比较，病例组与对照组等位基因型分布统计结果显示：位点rs7083506的(CC+CT)/TT等位基因型(x2=6.522，P=0.011，OR=3.273，95％CI=1.261-8.493)；rs11595882的(TT+TC)/CC等位基因型(x2=10.03，P=0.002，OR=2.510，95％CI=1.406-4.482)；rs7918136的(TT+TA)/AA等位基因型(x2=6.522，P=0.011，OR=3.273，95％CI=1.261-8.493)；rs11202058的(GG+GA)/AA等位基因型(x2=6.522，P=0.011，OR=3.273，95％CI=1.261-8.493)。四个位点危险型在病例组中的分布频率明显高于对照组。　　 4根据12tag SNP位点在所检测人群中的分布得到10种单体型，其中，单体型H8(CCCCACCTGTCG)、单体型H10(CCCCATCTGTCG)在病例组中的频率均高于对照组，且都存在显著差异(P<0.05)。　　 结论：　　 1、hWAPL基因的单核苷酸多态位点rs11595882 T、rs10887621 C、rs11202058G在宫颈癌患者中的分布存在明显差异，说明hWAPL基因遗传多态性与汉族妇女宫颈癌的发生有关，是宫颈癌发生的易感基因之一。　　 2、单体型H8(CCCCACCTGTCG)和H10(CCCCATCTGTCG)增加宫颈癌发生的危险性。

目录

文摘

英文文摘

引言

材料与方法

2.1 研究对象

2.2 试剂与仪器及试剂配制

2.3 实验步骤

2.4 质量控制

2.5 统计学处理

结果

3.1 病例组与对照组年龄的比较

3.2 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

3.3 等位基因型频数分析

3.4 SNP不同基因型分布比较分析

3.5 hWAPL基因12个SNP构成的单体型分析

讨论

4.1 WAPL基因与宫颈癌

4.2 单核苷酸多态性在人类疾病研究中的作用

4.3 宫颈癌SNP研究现状

4.4 WAPL基因的SNP位点在宫颈癌患者中的分布

结论

参考文献

综述

参考文献

缩略词索引

个人简历

在学期间发表的学术论文

致谢