枯草芽孢杆菌KC-5的分离鉴定及发酵工艺优化

摘要

土壤中含有丰富的微生物资源，枯草芽孢杆菌是其中具有重要研究和应用价值的微生物类群之一。由于具有很高的抗逆能力和抗菌防病作用，该菌在生物防治领域具有巨大的应用开发潜力。
　　本研究从青岛胶南市琅琊台油菜地根际采集土样，采用平板划线和平板对峙方法筛选土样中的微生物，获得一株对尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、层出镰刀菌、腐皮镰刀菌等多种病原真菌均具有抑制作用的拮抗菌株。经形态学、生理生化以及16S rRNA序列系统发育等分析，将分离到的拮抗菌株鉴定为枯草芽孢杆菌，并命名为KC-5。
　　为了提高该菌的发酵效率，本研究对其发酵培养基和摇瓶发酵条件进行了优化。确定了最佳发酵培养基组分为玉米淀粉5 g/L、豆饼粉12.5 g/L、NaCl12.18g/L、KH2PO40.5 g/L、CaCO31.25 g/L、MgSO40.2 g/L和MnSO40.25 g/L;最佳发酵条件为温度为30℃，初始pH值为7.0，接种量为2％，摇床转速为200 rpm。在最佳摇瓶发酵条件下，菌体数量达到47×108 cfu/mL。为了使其能够在生产中应用，又对其进行了发酵罐扩大培养，得到最大芽孢数为30.3×108cfu/mL，为微生物菌剂的开发奠定了基础。
　　为了验证枯草芽孢杆菌KC-5菌株在田间应用的生防潜力，本研究以黄瓜幼苗作为代表植物，以尖孢镰刀菌作为生防对象，对其进行了防效测定，结果表明，枯草芽孢杆菌KC-5对黄瓜茎枯病具有一定的生防潜力。

目录

声明

摘要

缩略词及其英汉对照

引言

第一章 文献综述

1．生防细菌及其研究

1．1 芽孢杆菌

1．2 假单胞杆菌

1．3 土壤放射杆菌

1．4 巴氏杆菌

2 生防枯草芽孢杆菌的研究进展

2．1 国外研究进展

2．2 国内研究进展

2．3 生防中枯草芽孢杆菌存在的问题与对策

3 枯草芽孢杆菌的发酵研究

3．1 影响枯草芽孢杆菌发酵的因素

3．2 枯草芽孢杆菌发酵工艺优化的方法

3．3 枯草芽孢杆菌发酵应用的研究

4 菌剂的开发、生产和应用

第二章 拮抗菌株的分离与筛选

1 材料

2 方法

2．1 菌株的分离、纯化与保存

2．2 拮抗菌的筛选与保存

2．3 抗抗菌对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制作用

3 结果与分析

3．1 菌株的分离结果

3．2 拮抗菌的筛选与分离

3．3 抗抗菌对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制作用

4 讨论

第三章 KC-5菌株的鉴定

1 材料

1．1 试验材料

1．2 培养基

2 方法

2．1 菌株的形态学观察及培养特征

2．2拮抗菌株的生理生化反应鉴定

2．3 KC-5菌株16S rDNA序列同源性分析

3 结果与分析

3．1 KC-5菌株的形态特征

3．2 生理生化特征

3．3 16S rRNA序列及同源性分析

4 讨论

第四章 KC-5菌株发酵培养基与发酵条件的优化及盆栽抗性验证

1 材料

1．1 试验材料

1．2 培养基

2 方法

2．1 枯草芽孢杆菌KC-5的生长曲线测定

2．2 KC-5菌株发酵培养基的优化

2．3 KC-5拮抗菌株发酵条件的优化

2．4 KC-5发酵罐扩大培养及糖分测定

2．5 KC-5菌株的盆栽抗性验证

3 结果与分析

3．1 KC-5菌株的生长曲线

3．2 发酵培养基的优化

3．3 摇瓶发酵条件的优化

3．4 KC-5发酵罐扩大培养及糖测定

3．5 KC-5菌株的盆栽抗性验证

4 讨论

全文结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢