马齿苋多糖的分离纯化及活性研究

摘要

马齿苋(Portulaca oleraceaL.)是我国古老的药食兼用植物。近年来，马齿苋以其丰富的营养、独特的药理作用以及药食兼用的特性，日益受到广泛的关注。研究表明，马齿苋具有调血脂、抗动脉硬化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等多种药理活性。多糖作为一种重要的生命物质，具有多种生物活性，特别是抗肿瘤、免疫调节作用受到广泛关注。本论文以马齿苋为原料，研究马齿苋多糖的提取、分离纯化及其体内免疫活性、体外抑瘤作用和抗氧化活性，为功能食品和药品的研究开发提供基础，为马齿苋的开发利用提供新途径。
　　 本论文的主要研究内容和结果如下：
　　 1、研究了马齿苋粗多糖的水提法优化工艺。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以多糖提取率为考察指标，进行单因素实验，考察固液比、温度、时间、提取次数等因素对提取率的影响。在此基础上，进行正交试验，优化水提法工艺条件。水提法优化工艺条件为温度100℃、时间2h、固液比1:15、提取次数4次，此条件下多糖提取率达94.26％，粗多糖得率为15.50％，多糖含量为22.60％。
　　 2、研究了马齿苋多糖的分离纯化工艺，测定了多糖组分的分子量，分析了其单糖组成。
　　 (1)比较分析了大孔树脂吸附法、H2O2法以及活性炭吸附法三种脱色方法对马齿苋水提液的脱色效果，结果表明大孔吸附树脂AB-8的效果较好。
　　 (2)对脱色后的马齿苋多糖溶液进行脱蛋白试验研究，比较了三氯乙酸法、sevag法、三氯乙酸-正丁醇法三种方法脱蛋白的效果，结果表明三氯乙酸法效果最好。
　　 (3)采用DEAE-52纤维素，对脱色脱蛋白后的马齿苋多糖进行纯化，得到POPS0、POPS1、POPS2、POPS3和POPS4五个多糖组分，纯度分别为84.31％、92.14％、90.45％、88.47％和82.16％，高效液相色谱法（HPLC）测得其分子量分别为1.801×104D、5.583×104D、2.721×105D、6.006×105D和9.443×105D。用气相色谱法测定多糖的单糖组成，结果表明：多糖POPS0中含有单糖葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.76:1；多糖POPS1中含有鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.61:1.12:1.4；多糖POPS2中含有阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖，其摩尔比为1.34:1.84:1.52:0.15；多糖POPS3中含有木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.62:1.22:1.48；多糖POPS4中含有阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1.22:0.67:0.41。
　　 3、研究马齿苋粗多糖(POP)的体内免疫活性。结果表明：马齿苋未脱蛋白粗多糖(POP-1)在剂量100mg/kg下，能明显增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p＜0.01)；在300mg/kg下，能显著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平(p＜0.001)；在100mg/kg、300mg/kg下，能增加免疫抑制小鼠的脾脏指数(P＜0.05)。马齿苋脱蛋白粗多糖POP-2在剂量300mg/kg下，能增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p＜0.05)；在300mg/kg下，能显著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平(p＜0.001)；在100mg/kg、300mg/kg下，能明显增加免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数（P＜0.01或p＜0.001）。
　　 4、采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定马齿苋粗多糖POP和纯化后多糖组分POPS1、POPS2、POPS3、POPS4对人胃癌肿瘤细胞株SGC、人辟癌肿瘤细胞株AGS和血癌肿瘤细胞株U937的生长抑制率。结果表明，各多糖对肿瘤细胞都有一定的抑制作用。POPS1对SGC的抑制作用最强，浓度为160μg/mL时，抑制率为49.27％；POPS2对AGS的抑制作用最好，浓度为320μg/mL时，抑制率为26.33％；POPS3对U937的抑制效果最明显，浓度为640μg/mL时，抑制率为66.74％。
　　 5、采用水杨酸法和DPPH法研究马齿苋多糖的体外抗氧化活性。结果显示粗多糖以及纯化后多糖都有抗氧化活性。马齿苋多糖POPS2对羟自由基以及DPPH自由基的清除作用最好，当浓度达到960μg/mL时对羟自由基的清除率达到92.15％，对DPPH自由基的清除率为80.52％。

目录

文摘

英文文摘

缩写与符号

第一章 绪论

1.1 马齿苋的研究进展

1.1.1 马齿苋的化学成分

1.1.2 马齿苋的药理活性

1.2 马齿苋多糖的研究进展

1.2.1 免疫调节作用

1.2.2 抗肿瘤作用

1.2.3 抗氧化作用

1.3 研究的目的和意义

1.4 本论文的主要研究内容

参考文献

第二章 马齿苋多糖水提工艺的研究

2.1 前言

2.2 材料与仪器

2.2.1 材料与试剂

2.2.2 仪器

2.3 实验方法

2.3.1 马齿苋多糖的提取

2.3.2 单因素试验

2.3.3 正交试验

2.3.4 标准曲线的绘制

2.3.5 多糖含量的测定

2.4 结果与讨论

2.4.1 单因素试验

2.4.2 正交试验和方差分析

2.5 本章小结

参考文献

第三章 马齿苋多糖的分离纯化研究

3.1 前言

3.2 材料与仪器

3.2.1 材料与试剂

3.2.2 仪器

3.3 实验方法

3.3.1 脱色试验

3.3.2 脱蛋白试验

3.3.3 纯化试验

3.3.4 分子量测定

3.3.5 单糖组成分析

3.4 结果与讨论

3.4.1 脱色试验

3.4.2 脱蛋白试验

3.4.3 纯化试验

3.4.4 分子量测定

3.4.5 单糖组成测定

3.5 本章小结

参考文献

第四章 马齿苋粗多糖的体内免疫活性研究

4.1 前言

4.2 材料与仪器

4.2.1 材料与试剂

4.2.2 仪器

4.3 实验方法

4.3.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

4.3.2 小鼠血清溶血素抗体生成试验

4.3.3 马齿苋粗多糖POP对小鼠免疫器官脏器系数的影响

4.4 结果与讨论

4.4.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

4.4.2 小鼠血清溶血素抗体生成试验

4.4.3 马齿苋粗多糖POP对小鼠免疫器官脏器系数的影响

4.5 本章小结

参考文献

第五章 马齿苋多糖的体外活性研究

5.1 前言

5.2 材料与仪器

5.2.1 材料与试剂

5.2.2 仪器

5.3 实验方法

5.3.1 体外抗肿瘤活性试验

5.3.2 抗氧化试验

5.4 结果与讨论

5.4.1 体外抗肿瘤活性试验

5.4.2 抗氧化试验

5.5 本章小结

参考文献

第六章 工作总结与展望

6.1 主要工作总结

6.2 工作展望

致谢

攻读硕士学位期间发表论文目录