ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ СЕРИН-ТРЕОНИНОВЫХ ПРОТЕИНКИНАЗ ШТАММА BIFIDOBACTERIUM LONGUM B379M И ИЗУЧЕНИЕ ИХ АКТИВНОСТИ

摘要

Ранее авторами у различных видов Bifidobacterium были идентифицированы шесть серин-треониновых протеинкиназ (СТПК), обозначенных Pkb1-Pkb6. В данной работе оптимизированы методы выделения их каталитических доменов из штамма B. longum B379M: разработаны методы выделения нативных белков Pkb3 и Pkb4, денатурированного белка Pkb5 и белков Pkb1, Pkb2, Pkb6 из телец включения, оптимизированы условия проведения диализа для ренатурации белков. Все ферменты выделены в количествах, достаточных для измерения активности, их гомогенность подтверждена данными Ds-Na-ПААГ-электрофореза. Впервые исследована способность к автофосфорилированию каталитических доменов протеинкиназ Pkb3 и Pkb4, выделенных в нативном виде, и протеинкиназ Pkb1 и Pkb6, выделенных из телец включения. Явление автофосфорилирования было обнаружено только у каталитического домена протеинкиназы Pkb3.