保健食品中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究

摘要

目的:
　　采用液质联用技术对保健食品中黄酮类功效成分进行快速筛选，建立准确可靠的定性定量方法，为保健食品的质量标准研究提供一定的研究思路和方法示范。所建立的方法可应用于生产企业，也可应用于检测、监管机构，从而更好地对保健食品进行质量控制和监管，打击假冒伪劣商品，规范保健食品市场。
　　方法:
　　对13个含银杏叶保健食品、13个含大豆异黄酮保健食品、葛根枳棋软胶囊和蜂胶液进行示范性研究。
　　1、保健食品样品收集。从市面上收集具有代表性的不同批号、不同厂家、不同包装、不同剂型同一主要原料的保健食品，按照原标准《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）收载项下的质量评价方法进行检测，判断是否为合格产品。
　　2、采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查保健食品中多种黄酮类化合物。分别对色谱柱、流动相体系、数据采集模式、离子源参数和碰撞能量等参数进行优化，并通过与对照品对比、数据库匹配及文献数据分析，明确保健食品中所含的黄酮类成分。
　　3、采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法建立同时测定保健食品中多种黄酮类化合物的定量分析方法。采用负离子电喷雾选择反应监测（SRM）模式，分别对管镜补偿电压、碰撞能量和定量离子对等参数进行优化，同时进行检测限、定量限、线性范围、精密度、重复性、稳定性和加样回收率等方法学考察。
　　4、以相关功效成分及其含量为指标，对不同来源含银杏叶保健食品和含大豆异黄酮保健食品的差异进行比较研究。
　　5、对所检测的每个黄酮类化合物的裂解途径进行解析，总结黄酮类化合物电喷雾质谱(ESI-MSn)特征裂解规律，为建立黄酮类成分目标物的精确分子量、二级MS2质谱图的数据库及一定色谱条件下保留时间的数据库奠定基础。
　　结果:
　　1、参照原质量标准方法进行检测，市场上部分保健食品的功效成分含量未达到企业标准中功效成分的标示量。
　　2、采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查了13个含银杏叶保健食品中16种黄酮类化合物、13个含大豆异黄酮保健食品中6种异黄酮类化合物、葛根枳棋软胶囊中20种黄酮类化合物及蜂胶液中16种黄酮类化合物。
　　3、采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法同时检测含大豆异黄酮保健食品中6种异黄酮化合物的含量:在4分钟内完成了对大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素6种异黄酮化合物的定量检测;并将结果与采用普通高效液相色谱法测得的数据进行比较，结果表明，本方法快速、简便可靠、专一性好。
　　4、比较了不同来源保健食品成分与含量的差异:同一产品，由不同经销商售卖时更换包装，价格偏差幅度大，产品质量无明显差异;不同批号的同一产品，存大较大的质量差异，这可能与生产企业内部质量控制力度不够有关;含同一主要原料的不同保健食品，所含功效成分存在较大差异，这可能与原料采集、制备工艺、储存条件等诸多因素有关。
　　5、黄酮类化合物裂解规律:黄酮苷元的碎片离子裂解主要发生在C环，产生系列C环裂解的i,jA-与i,jB-特征离子，包括Retro Diels-Alder(RDA)裂解;同时伴随着丢失CH3、CO、CO2、 H2O、C3O2等中性分子。黄酮O-糖苷的质谱裂解主要为糖苷键的断裂、糖糖键的断裂和糖环的交叉环切除裂解。黄酮C-糖苷负离子模式下的质谱裂解与黄酮O-糖苷的裂解差别较大，黄酮C-糖苷多以糖环的交叉环切除裂解为主，几乎不产生苷元离子，同时也伴随着丢失中性分子。负离子模式下，己糖裂解产生[M-H-120]-及[M-H-90]-碎片离子，戊糖裂解产生[M-H-60]-及[M-H-90]-碎片离子。
　　结论:
　　本研究采用液质联用技术对保健食品中黄酮类功效成分进行了快速筛选，建立了准确可靠的定性定量方法，明确了相关保健食品中黄酮类成分;通过比较市面上同一主要原料不同来源的保健食品中黄酮类功效成分的差异，表明了保健食品存在参差不齐的现象和质量标准不统一的问题。提示应加强保健食品的质量监管，加大保健食品功效成分的基础性研究工作，努力提高检测分析水平，为规范保健食品市场提供技术支持。本课题所建立的方法准确、快速、灵敏，通过示范性研究为保健食品质量控制提供了可靠实用的技术手段。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 我国保健食品研究现状

1．1．1 我国保健食品的基本概况

1．1．2 我国保健食品的发展趋势

1．1．3 我国保健食品存在的主要问题

1．2 保健食品功效成分的检测

1．2．1 保健食品功效成分的分类

1．2．2 保健食品功效成分测定方法的现状

1．3 黄酮类化合物

1．3．1 黄酮类化合物的分类及生理活性

1．3．2 黄酮类化合物在保健食品中的应用

1．4 液质联用技术

1．4．1 液质联用技术的特点

1．4．2 液质联用技术在药物分析中的应用

1．4．3 液质联用技术存在的主要问题

第二章 含银杏叶保健食品中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究

2．1 仪器与试药

2．1．1 仪器

2．1．2 试药

2．2 方法与结果

2．2．1 含银杏叶保健食品总黄酮含量测定

2．2．2 含银杏叶保健食品中黄酮类成分的UPLC-Q-TOF-MS快速分析

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 含大豆异黄酮保健食品中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究

3．1 仪器与试药

3．1．1 仪器

3．1．2 试药

3．2 方法与结果

3．2．1 含大豆异黄酮保健食品中异黄酮成分的UPLC-Q-TOF-MS快速分析

3．2．2 含大豆异黄酮保健食品HPLC含量测定

3．2．3 含大豆异黄酮保健食品LC-MS含量测定

3．3 讨论

3．4 小结

第四章 葛根枳棋软胶囊中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究

4．1 仪器与试药

4．1．1 仪器

4．1．2 试药

4．2 方法与结果

4．2．1 葛根枳棋软胶囊总黄酮含量测定

4．2．2 葛根枳棋软胶囊保健食品中黄酮类成分的UPLC-Q-TOF-MS快速分析

4．3 讨论

4．4 小结

第五章 蜂胶液中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究

5．1 仪器与试药

5．1．1 仪器

5．1．2 试药

5．2 方法与结果

5．2．1 蜂胶液总黄酮含量测定

5．2．2 蜂胶液中黄酮类成分的UPLC-Q-TOF-MS快速分析

5．3 讨论

5．4 小结

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢