LC-MS联用技术分析金线莲中黄酮类和银线莲中核苷类活性成分及银线莲指纹图谱的研究

摘要

LC-MS联用技术是中药化学成分定量、定性分析的重要手段之一。本论文应用LC-MS联用技术分析金线莲的4种黄酮类成分；银线莲的6种核苷类成分；并以银线莲化学成分研究为基础，建立了银线莲高效液相（HPLC）的指纹图谱，为此药材整体质量控制提供依据，并利用所建立的指纹图谱，区分同一个科别不同种属的金线莲和银线莲药材。本研究分为三个部分：
　　第一章：LC-MS分析金线莲中4种黄酮类物质。应用超声波辅助恒温萃取法提取金线莲中的异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、异槲皮苷、槲皮素和异鼠李素4种黄酮类化合物，高效液相色谱法－电喷雾电离/离子阱质谱法（HPLC－ESI/MS)对提取物中4种黄酮类化合物进行测定和鉴别。色谱条件：Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流动相：A-0.8％乙酸+0.2%氨水溶液，B-甲醇，梯度洗脱:0-10 min，50-58%B；10.01-30 min，65%B。流速：1.0 ml/min，检测波长：368 nm，柱温：30℃，进样量：20μl。质谱条件：电喷雾离子源(ESI源)，正离子监测。不同产地金线莲中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、异槲皮苷、槲皮素和异鼠李素含量分别是：福建产地0.0940 mg/g、0.0530 mg/g、0.0390 mg/g和0.0700 mg/g，广西产地0.0890 mg/g、0.0670 mg/g、0.0420 mg/g和0.0610 mg/g；此法分析金线莲中这4种黄酮类物质具有快速、简便的特点，且不同产地金线莲中这4种具有重要药理活性黄酮类化合物含量有差异，首次发现金线莲中含有异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷。
　　第二章LC－MS分析银线莲中6种核苷类物质。应用超声波辅助萃取法水提银线莲中的胞苷、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、腺苷6种核苷类物质，高效液相色谱法－电喷雾电离/离子阱质谱法（HPLC－ESI/MS)对提取物中6种核苷类物质进行测定和鉴别。色谱条件：Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5μm)色谱柱，流动相：A-0.1 mol/L乙酸铵水溶液；B-甲醇，线性梯度洗脱；流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，检测波长：260 nm，进样量：20μl。质谱条件：电喷雾离子源(ESI源)，正离子监测。银线莲药材中检测到胞苷、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷和腺苷6种核苷成分，6种核苷成分浓度在1.25～80.0μg/ml范围内呈良好线性关系（r≥0.9994)，回收率在92.7%～96.8%之间，RSD≤1.6%。测得银线莲药材提取物中胞苷、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷和腺苷含量分别为0.106 mg/g、0.339 mg/g、0.0699 mg/g、0.0820 mg/g、0.0308 mg/g和0.107 mg/g。此法简便、灵敏快速，首次报道银线莲中含有重要药理活性的6种核苷类物质，为银线莲的药理和临床试验研究提供理论基础。
　　第三章银线莲高效液相指纹图谱研究。通过银线莲化学成分的研究，建立了银线莲高效液相（HPLC）指纹图谱，为规范银线莲药材的质量研究提供基础研究资料；对提取方法、流动相组成和检测波长等进行优化，确立了银线莲指纹图谱分析的最佳条件，建立的该药材HPLC指纹图谱具有专属性、特征性和重现性特点。

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前言

第一章 LC-MS分析金线莲中4种黄酮类物质

1 引言

2 材料和方法

3 结果与讨论

4 结论

第二章 LC-MS分析银线莲中6种核苷类物质

1 引言

2 材料和方法

3 结果与讨论

4 结论

第三章 银线莲高效液相指纹图谱研究

1 引言

2 材料与方法

3 结果与讨论

4 结论

参考文献

第四章 综述: LC-MS联用技术在中药化学成分研究中的应用

致谢

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